RNA转染

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …

文献标题：SARDH in the 1-C metabolism sculpts the T-cell fate and serves as a potential cancer therapeutic target 期刊：Cellular & Molecular Immunology 影响因子：21.8 概要：本研究通过泛癌单细胞转录组分析，发现线 …

1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …

1.RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转 …

       近年来，对肠促胰岛素和骨的关系的兴趣不断增加。之前的研究已经表明胰高血糖素样肽-1（GLP-1）及其受体激动剂对骨骼代谢具有有益的合成代谢作用，如通过肠-骨轴促进成骨细胞的增殖和分化。然而，对于GLP-1对成骨细胞凋亡的影响及其相关机制并不清楚。现分享一篇RNA转染试剂（Entranster）与利拉鲁肽和 …

为保证RNA转染的高效率，在转染过程中应注意： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境 …

帕金森病是一种常见的神经系统疾病，是典型的纹状体功能障碍模型。它是仅次于阿尔茨海默病的第二常见神经退行性疾病。帕金森病的特征之一是黑质多巴胺能神经元的逐渐丧失。帕金森病患者通常有震颤、僵硬和运动迟缓的症状。遗传因素和环境因素已被纳入帕金森病的病因。对下丘脑核进行高频脑深部刺激是一种流行的外科治疗方法，但不适用于早期的PD，发展中国家的患者也无法获得。现分享一 …

      骨质疏松症是一种以骨密度和骨强度降低为特征的疾病，常见于老年人。Caveolin-3（Cav3）是caveolae膜结构域的主要结构蛋白，已被报道可参与细胞信号传导和维持细胞结构。现分享一篇RNA转染（entranster）与Cav3通过Wnt信号通路对骨质疏松大鼠模型骨形成的影响研究的文献，以供参考。 文献地址：https://link.spr …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …