长链非编码RNA在人肝癌(HCC)中异常表达,并与HCC的进展有关。lncRNA linc0511(linc0511)已被证实在一些肿瘤中作为肿瘤启动子。然而,作为一中新颖的LncRNA,linc00511的具体功能仍然不是很清楚。现分享一篇RNA转染(engreen)与LncRNA LINC00511和肝癌细胞增殖和转移研究的文献,旨在评估 …
阅读更多 »如何提高siRNA细胞转染效率
为了达到高的siRNA转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RN …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染实验步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤,以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μ …
阅读更多 »siRNA转染实验的几点建议
为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与CHL1与胶质瘤细胞研究
与L1CAM同源(接近同源的L1)的细胞粘附分子(CHL1)是细胞粘附分子L1(L1CAM)基因家族的一个成员。虽然其表达和功能已经在一些肿瘤的报道,在小鼠胶质瘤发生发展中的作用尚不清楚。现分享一篇RNA转染(Entranster)与CHL1与胶质瘤细胞研究的文献,以供参考。
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制研究
随着生活、工作方式的改变及社会人口的老龄化,骨关节退行性病变已成为高发疾病,其中代表性疾病之一为骨性关节炎(osteoarthritis, OA)。最近研究表明:WISP-1 具有促进关节软骨破坏的作用 。WISP-1 在正常软骨和滑膜中几乎不表达,而在退变的软骨及滑膜(如OA)中WISP-1异常增高,通过诱导MMPs及aggrecanases的分泌而促进胶 …
阅读更多 »哪种RNA转染试剂效果更好? Turbofect or EntransterTM-R4000?
近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent(Thermo)和 EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下: 实验方法 转染试剂:Turbofect transfection reagent(Thermo)和 EntransterTM-R4 …
阅读更多 »细胞siRNA转染有哪些方法?
siRNA导入细胞有以下几种方法:化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素:细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术(Entranster)是最为常用的方法,而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。
阅读更多 »siRNA转染过程中常见问题及解答
1.RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转 …
阅读更多 »RNA转染(entranster)后沉默现象不明显怎么办?
可能原因: 1. RNA与转染试剂比例不佳。可进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳。 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。 3. RNA效率不高。选择最优RNA,并采用已知高效的RNA做对照。 4. RNA酶污染。建议无RNA酶和内毒素的吸头、离心管和溶液等材料和实验器具。 5. 转染后培养时间不够。在mRNA水平可以到48 小时以后验证结果,在蛋白水 …
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