英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
siRNA转染效率不理想，常见的原因有：1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与丹参酮IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用研究
丹参酮 IIA（Tanshinone IIA，Tan IIA）是一种从丹参干根中提取的生物活性物质，具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。然而，Tan IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用机制仍有待进一步阐明。现分享一篇运用RNA转染（Entranster）的方法的文献，通过阐明Tan IIA在p53基因缺陷的H1299细胞中的抗肿瘤作用机制，以确定丹参酮IIA …
阅读更多 »RNA转染与B细胞成熟抗原和多发性骨髓瘤细胞存活研究
多发性骨髓瘤（MM）是一种无法治愈的血液恶性肿瘤，其特点是恶性浆细胞克隆性增殖，与大多数患者产生单克隆免疫球蛋白有关。细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10、干扰素-α和B细胞活化因子（BAFF）在促进MM细胞生长和耐药中的作用已得到明确阐述。越来越多的证据表明BAFF影响MM细胞的生长、存活、迁移和耐药性。B细胞成熟抗原（BCMA）是BAFF …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μ …
阅读更多 »RNA转染与小鼠LRP5基因杂合缺失及调控成骨细胞分化研究
骨骼系统稳态受免疫系统的动态影响。低密度脂蛋白受体相关蛋白5（LRP5）是Wnt信号通路的共同受体，它调节人和小鼠的骨代谢。免疫紊乱可导致骨代谢异常。目前还不清楚LRP5是否以及如何改变免疫系统的平衡来调节骨稳态。 现分享一篇RNA转染（Entranster）与小鼠LRP5基因杂合缺失改变免疫细胞形态及调控成骨细胞分化研究的文献，以供参考。 文献地址：htt …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制研究
随着生活、工作方式的改变及社会人口的老龄化，骨关节退行性病变已成为高发疾病，其中代表性疾病之一为骨性关节炎（osteoarthritis, OA）。最近研究表明：WISP-１ 具有促进关节软骨破坏的作用 。WISP-１ 在正常软骨和滑膜中几乎不表达，而在退变的软骨及滑膜（如OA）中WISP-１异常增高，通过诱导ＭＭＰs及aggrecanases的 …
阅读更多 »怎样提高悬浮细胞的siRNA转染效率？
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成 …
阅读更多 »通过转染双链siRNA 在哺乳动物细胞中进行RNA 干扰
长链dsRNA 不能用于多数哺乳动物细胞中，这是由于它能诱导干扰素反应而引发基因表达和细胞凋亡的变化。本方案介绍了一种向哺乳动物细胞中转入短的双链siRNA 的方法，双链siRNA 因其长度过短而不能引起与dsRNA 相关的序列非特异性反应。本方案适用于24 孔板中生长的细胞。如果使用了其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿，则需要根据培养孔的表面积换算细胞密度 …
阅读更多 »RNA转染（entranster）与多发性骨髓瘤中Hedgehog和NF-κB信号通路之间相互作用研究
多发性骨髓瘤是一种无法治愈的浆细胞恶性肿瘤。Hedgehog（hh）和NF-JB信号通路在骨髓瘤被观测到异常激活，并通过促进骨髓瘤细胞生长、存活和耐药性在骨髓瘤的发展中起到关键作用。现分享一篇RNA转染（entranster）与多发性骨髓瘤中Hedgehog和NF-κB信号通路之间相互作用研究的文献，以供参考。
阅读更多 »RNA转染与mir-34a通过靶向Foxp3损害Treg/Th17平衡研究
调节性T（Treg）细胞亚群及其特异性转录Foxp3是通过控制效应器T（Teff）细胞反应维持免疫稳态的独特细胞类型。尽管有Treg/teff紊乱的Treg细胞中的缺陷通常会导致自身免疫性疾病，但其确切机制尚未完全揭示。现分享一篇RNA转染（entranster）与mir-34a通过靶向Foxp3损害Treg/Th17平衡研究的文献，以供参考。 …
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