柯萨奇病毒B3(CVB3)是病毒性心肌病最重要的致病因子,但目前尚无特异性抗病毒药物。小干扰RNA(siRNA)通过转录后基因沉默,已被用作抗病毒治疗策略。现分享一篇RNA转染(Entranster)与小干扰RNA在HeLa细胞中的潜在抗病毒作用研究的文献,以供参考。
阅读更多 »如何优化RNA转染条件?
可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …
阅读更多 »RNA转染实验的影响因素
1. 转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2. &n …
阅读更多 »质粒被酶切过还可以电转吗?
可以,但得分情况来看: 如果质粒是线性化了(即被酶切成线状DNA): 可以电转,但是效率明显低于超级螺旋质粒(超螺旋 plasmid,通常是未切割、天然状态下的质粒结构)。 线性质粒在细胞内容易被核酸酶降解,稳定性和转化成功率比超螺旋质粒低很多。 有些时候,比如做基因组编辑(CRISPR knock-in)、整合型表达载体(需要基因组插入时),反而故意使用线 …
阅读更多 »ECL发光液与精胺改善心肌梗死后的心脏功能障碍研究
精胺是一种天然多胺,在哺乳动物细胞中含量丰富,参与细胞生长、增殖和再生。最近,口服精胺补充剂可通过增强自噬通量对年龄相关的心脏功能障碍具有心脏保护作用。然而,精胺对心肌梗死(MI)后心肌损伤和心脏功能障碍的影响仍不清楚。现分享一篇ECL发光液(enlight)与精胺改善心肌梗死后的心脏功能障碍研究的文献,以供参考。 文献地址:https://b …
阅读更多 »分步转染,先电转GFP-mRNA,表达很好,然后第二天电转了一个红色荧光DNA质粒,第三天观察的时候只看到了少数细胞有红色荧光,看不到绿色荧光了,这是怎么回事呀?按说GFP已经表达了,怎么还能消失了呢
根据你的描述,GFP在第一天有很好的表达,但在第二天转染DNA质粒后,第三天绿色荧光消失,只有少数细胞有红色荧光。这可能涉及到几个不同的因素: 1. DNA质粒表达对GFP表达的抑制 高浓度DNA引起的翻译抑制:你已经电转过mRNA,然后再转DNA质粒,这可能引发细胞对大分子DNA的免疫反应,比如激活干扰素反应。这可能抑制了翻译,不仅影响红色荧光蛋白(DNA …
阅读更多 »影响RNA转染实验的因素有哪些?
1. 转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. 2. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试 …
阅读更多 »病毒包装方法的突破,让众多实验室一周内发表高分文章
传统上,要在动物进行基因、蛋白水平的相关研究,需要通过慢病毒、腺病毒等的介导或者转基因动物(基因敲除动物)进行。前者需要将相关基因克隆,包装到病毒中,通过病毒感染的方法将基因转到动物体内表达,后者需要特别培育相关动物。 这2种方法都面临方法过程复杂,周期长,花费昂贵的特点,这其实阻碍了很多研究的深入,很多实验室甚至大实验室面临动物研究的这些问题都止步不前,从 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)lncRNA与乳腺癌治疗研究
长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子,它们并不编码蛋白,而是以RNA的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的表达水平。LncRNA ASBEL已经被鉴定为编码抗增殖蛋白的BTG3(B细胞易位基因3)基因的反义转录物。 有报道称,在三阴性乳腺癌(TNBC)中BTG3显著下调。现分享 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与膜联蛋白A7和大鼠继发性脑损伤研究
谷氨酸兴奋性中毒参与了脑出血(ICH)引起的继发性脑损伤(SBI)。突触体相关蛋白23(SNAP23)和SNAP25分别参与突触前谷氨酸的释放和突触后谷氨酸受体(NMDA受体)运输,这两者对于谷氨酸介导的兴奋性毒性都是必不可少的。SNAP23和SNAP25具有较高的同源性,SNAP23被证明可与膜联蛋白A7(ANXA7)相互作用。现分享一篇体内转染(Entr …
阅读更多 »
英格恩生物技术博客 生物实验干货分享