我认为,要想更高的细胞DNA转染效率,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率 …
阅读更多 »细胞DNA转染效率低的原因
DNA转染效率低的原因可从以下几方面找: 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策:用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策:对大多数细胞而言,质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3,一般要做优化实验,比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策:用好的质粒纯化试剂确保质 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与膜联蛋白A7和大鼠继发性脑损伤研究
谷氨酸兴奋性中毒参与了脑出血(ICH)引起的继发性脑损伤(SBI)。突触体相关蛋白23(SNAP23)和SNAP25分别参与突触前谷氨酸的释放和突触后谷氨酸受体(NMDA受体)运输,这两者对于谷氨酸介导的兴奋性毒性都是必不可少的。SNAP23和SNAP25具有较高的同源性,SNAP23被证明可与膜联蛋白A7(ANXA7)相互作用。现分享一篇体内 …
阅读更多 »siRNA转染与成纤维细胞瘤细胞l929-a研究
L929成纤维细胞瘤细胞(l929-a)和L929纤维肉瘤细胞(l929-n)是不同的细胞系,常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α(TNFα)的研究,TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而,当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时,l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死,在l929-a中却不是 …
阅读更多 »是否有嘌呤霉素筛选标记的病毒的病毒滴定protocol,看了好多好多不一样的?这个有比较权威又大众的滴度操作流程吗?
关于使用嘌呤霉素筛选标记(puromycin resistance marker)的慢病毒(lentivirus)或逆转录病毒(retrovirus)进行病毒滴定(virus titration)的 protocol,确实有不少不同的做法,这是因为不同实验室根据自己的系统和需求进行了优化。但是,有一些权威且广泛应用的标准流程可以作为通用参考,下面是整理的一个 …
阅读更多 »RNA转染与Cav3通过Wnt信号通路与骨质疏松大鼠模型骨形成研究
骨质疏松症是一种以骨密度和骨强度降低为特征的疾病,常见于老年人。Caveolin-3(Cav3)是caveolae膜结构域的主要结构蛋白,已被报道可参与细胞信号传导和维持细胞结构。现分享一篇RNA转染(entranster)与Cav3通过Wnt信号通路对骨质疏松大鼠模型骨形成的影响研究的文献,以供参考。 文献地址:https://link.spr …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想的原因
siRNA转染效率不理想,常见的原因有: 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率 …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与纳米羟基磷灰石调控成骨细胞分化研究
羟基磷灰石(HAP)在骨骼形成和骨重塑中起着重要作用。合成HAP与自然形成的HAP相似,已广泛应用于骨科和牙科植入。尽管纳米HAP在高浓度下容易聚集,但分散的纳米HAP在成骨细胞分化中的细胞内命运和作用机制仍有待充分阐明。现分享一篇ECL发光液(enlight)与纳米羟基磷灰石调控成骨细胞分化研究的文献,以供参考。
阅读更多 »Am J Cancer Res | 北京大学附属医院报道:软骨肉瘤治疗研究新进展
该团队在《Am J Cancer Res》期刊发表了题为“BMPR2-pSMAD1/5 signaling pathway regulates RUNX2 expression and impacts the progression of dedifferentiated chondrosarcoma”的研究论文。论文实验使用了RNA体内 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与高迁移率族B1在大鼠冠状动脉微栓塞致心肌损伤中的作用研究
冠状动脉微栓塞(CME)是急性心肌梗死(AMI)急诊经皮冠状动脉介入治疗的常见并发症,发生率为15%~20%。它可以直接导致“无血流”或“血流缓慢”。它是AMI患者长期预后不良和主要心脏不良事件的独立预测因子。研究表明,CME引起的局部心肌炎症是导致进行性心功能不全的主要原因。现分享一篇体内转染(Entranster)与高迁移率族B1在大鼠冠状动脉微栓塞致心 …
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