英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
细胞坏死是一种缺乏细胞凋亡和自噬特征的细胞死亡。在过去的几年中，人们发现坏死的发生和过程是程序性的和严格调节的。现分享一篇ECL发光液（enlight）与氧化应激诱导细胞坏死研究的文献，以供参考。
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与IL-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究
嗅间充质干细胞（OE-MSCs）是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。OE-MSCs通过调节T细胞的反应，包括调节性T细胞（Treg）的上调和Th1/Th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子，IL-17在胶原诱导性关节炎（CIA）的发展过程中起着关键的作用。然而，目前尚不清楚IL-17水平的升高是否会影响OE-MSCs在炎症状态 …
阅读更多 »揭秘RNAi，缔造实验神话
用siRNA进行transient transfection不稳定，几代细胞以后，症状就会消失，所以在转染几天（1-3）后要立刻抽提蛋白，进行分析。 用质粒中的shRNA进行转染，如果质粒含有抗生素位点，可以进行筛选，获得较稳定的细胞株系，但需要时间较长 用病毒中的shRNA进行感染（infection），抗生素筛选后，可以获得很稳定细胞株系。 瞬时RNAi …
阅读更多 »体内转染（entranster）与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究
脑内出血（intracerebral hemorrhage，ich）可引起有效的氧化应激反应和炎症过程，异甘草素（isoliquiritigenin）是一种类黄酮物质，可以激活核因子e2相关因子2（nrf2）介导的抗氧化系统，负调控核因子b（nf-κbκκ）和nod受体家族。现分享一篇体内转染（entranster）与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究的文献，以供 …
阅读更多 »电转染试剂（Entranster-E）转染Huh7细胞效果图
siRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »IFN-γ诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFs）铁死亡机制研究
文献：IFN-γ could induce ferroptosis in keloid fibroblasts by inhibiting the expression of serpine2 期刊：Cell Death Discovery 影响因子：6.1 实验意义 本研究揭示了IFN-γ通过调控serpine2-system Xc⁻轴诱导瘢痕疙瘩成纤维细 …
阅读更多 »siRNA细胞转染效率低下的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »应用多种神经损伤模型探究PRMT6在背根神经节中的作用研究
文章标题：Protein arginine methyltransferase-6 regulates heterogeneous nuclear ribonucleoprotein-F expression and is a potential target for the treatment of neuropathic pain* 《蛋白质精氨酸甲基转 …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想的原因
siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …
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