分子生物学

下列步骤描述了使用Cy3作为代表性标记试剂， 用荧光succinimidy l 活性酶标记羊抗体。其他水溶性荧光标记物的使用与此类似(Mujumdar et al. 1993) 抗体分离与纯化 来源于血清，腹水或培养基的抗体，在标记反应开始以前，需纯化以除去蛋白质和其他含有氨基团的分子。在与标记反应混合以前，抗体不应进行强缓冲处理，不然标记混合物会降低，所有 …

特异性差，出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面： 1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2. 一抗是多克隆抗体，或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体，或降低抗体浓度，缩短抗体孵育时间，优化一抗和二抗的使用浓度。 3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量，延长洗膜时间，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20 …

这个问题问得很实际，也很关键，特别是在做质粒转化实验的时候容易遇到。 回答一：大肠杆菌电转后，4℃下操作是否会导致死亡？ 不会直接导致大面积死亡，但确实会影响转化效率。 电转后的大肠杆菌处于一种“受伤”的状态，细胞膜被电击短暂打破，虽然迅速恢复，但暂时很脆弱。 如果在电转后没有及时给予复苏（比如在SOC、LB等液体培养基中摇床复苏30–60分钟），就直接在低 …

材料 SP2/0-Ag14 骨髓瘤细胞系（药物标记的非分泌型； ATCC) 添加10mmol/L HEPES 和1mmol/L 丙酮酸钠的DMEM- 10 和DMEM-20 完全焙养基 免疫的实验动物：小鼠、大鼠或仓鼠（在初次接种后10~14d 备用) 50% （m/V) PEG 溶液，无菌 DMEM 完全培养基，未添加血清 氯化铵溶液： 0. 02mol/ …

可以，但得分情况来看： 如果质粒是线性化了（即被酶切成线状DNA）： 可以电转，但是效率明显低于超级螺旋质粒（超螺旋 plasmid，通常是未切割、天然状态下的质粒结构）。 线性质粒在细胞内容易被核酸酶降解，稳定性和转化成功率比超螺旋质粒低很多。 有些时候，比如做基因组编辑（CRISPR knock-in）、整合型表达载体（需要基因组插入时），反而故意使用线 …

荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象，即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光，但亮光很快就消逝了，压完片后条带却很弱，甚至没有条带，发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带 …