分子生物学

慢病毒感染效率低，尽管用胶体金测试显示滴度很高，可能有以下几个原因： 病毒颗粒质量：虽然胶体金检测显示病毒滴度很高，但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损，无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异：胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量，但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒（感染性单位）可能比实际检测的数量要低 …

shRNA转染后，进行RT-PCR的最佳时间取决于多种因素，包括细胞类型、转染效率、shRNA的表达和目标基因的降解速度。一般来说，在转染后的24到72小时内进行RT-PCR是比较常见的时间点。具体来说： 24小时后：在这个时间点，可以开始检测到shRNA的表达以及目标基因的初步下调情况。对于一些高效的shRNA，这个时间点可能已经有显著的基因沉默效果。 4 …

在Maxam 和Gilbert 发展的DNA 化学测序法(1977, 1980) 中，碱基专一性化学试剂在一种或两种特定核苷酸位置上随机断裂已纯化的3’端或5′ 端标记的DNA, 产生4 套寡聚脱氧核糖核苷酸。因为只有末端标记的DNA 片段才能在测序胶的放射自显影图中显示出来，所以只能观察到含有固定末端的片段，这样就产生了4 列DNA …

可通过以下几个方面进行改进： 1. 可减少蛋白上样量； 2. 降低一抗二抗稀释度，减少抗体孵育时间； 3. 如果背景深的话，则要把发光液沥干些再压片；如果背景不深则需减少发光时间和显影时间。 4.选择合适的发光液，比如Enlight。

做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清楚“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。     影响发光的因素主要有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.和发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。这里面，在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的，抗体浓度过高，洗涤不充 …

一、原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的 …

特异性差，出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面： 1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2. 一抗是多克隆抗体，或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体，或降低抗体浓度，缩短抗体孵育时间，优化一抗和二抗的使用浓度。 3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量，延长洗膜时间，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20 …

AMPK是细胞极为重要的能量感受器，当细胞处于能量匮乏的状态时AMPK会被激活，AMPK激活后可以磷酸化不同的下游底物从而促进分解代谢和抑制合成代谢，最终使细胞达到能量平衡状态。  UHRF1是至关重要的DNA甲基化调控因子，它参与DNA维持甲基化过程的功能已经研究的比较清楚。另外，还有研究表明UHRF1参与DNA的损伤修复。但除此之外，UHRF1是否能直接 …

问题 可能的原因 解决办法 四条泳道同一个位置都有条带，特别是靠近引物的地方 DNA 模板不纯 观察对照DNA 是否存在同样问题，如果不存在，重新制备模板DNA 试剂不纯或试剂老化；dNTP量不足 准备新鲜试剂 DNA 聚合酶活性低 使用新鲜制备的酶。 加入更多的酶，如每个反应多加4 倍。使用前再稀释酶． 将标记反应缩减至2 min, 将T7DNA 聚合酶从 …

在体外转录法制备dsRNA（双链RNA）的过程中，确定mRNA的靶区域是关键的一步。以下是一些常用的方法和步骤，以帮助确定mRNA的靶区域： 1. 目标基因的选择 首先，确定你想要抑制或研究的目标基因。你需要有这个基因的完整序列信息（通常从基因数据库中获得，如NCBI）。 2. 设计siRNA或shRNA序列 设计小干扰RNA（siRNA）或小发夹RNA（s …