英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
本方案介绍一种通过试剂向果蝇S2 细胞转运siRNA 以触发RNA 干扰的有效方法。本方案适用于24 孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿，需要根据培养孔的表面积换算细胞密度和试剂用量（表1 ) 。 表1 果蝇细胞转染所用细胞， 转染试剂和siRNA （或者ASO) 的体积 培养板或培养皿 24孔 12孔 6孔 6cm 10cm 每孔 …
阅读更多 »Experimental immunology | 是什么在助长红斑狼疮？
中国西安交通大学医学院在最新的研究中首次表明：lncRNA MIAT 通过体内降解miR-222来上调 CFHR5 表达，增强狼疮疾病的活动，并在《Experimental immunology》期刊上发表了题为 “LncRNA MIAT enhances systemic lupus erythematosus by upregulating …
阅读更多 »Plos one 2015：肺癌细胞凋亡的调控——ENTPD5
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高。 肺癌被认为是一种遗传性疾病，其中异常的内源性致病基因的表达造成基因组不稳定，增强肿瘤细胞的活力和侵袭性。尽管成功治疗原发性恶性肿瘤，仍有在1/4以上的术后患者复发、转移。 ENTPD5是一种内质网酶，水解UDP为UMP，促进蛋白的N …
阅读更多 »细胞转染为什么不能加血清？
看过很多细胞转染的高手，在做真核细胞转染时，都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前，将融合的细胞的含血清的培养液弃去，用无血清培养基清晰后再加入混合物，4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢？为什么这些转染试剂要求不含血清呢？ 传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂 …
阅读更多 »病毒转染原理及步骤
病毒转染原理及步骤 在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 病毒转染包括以下步骤：1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起 …
阅读更多 »细胞转染应该什么时候加抗生素？
细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中，在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选， …
阅读更多 »EXP BIOL MED 2015 : 冠状动脉微栓塞！ PDCD4/NF-κB有关?
广西医科大学附属第一医院心内科的老师在临床实践中发现，冠状动脉微栓塞（CME）是急性心肌梗死的常见并发症，发生率约10%～20%，是影响微心肌微循环灌注的主要原因。 NF-κB激活是CME引起的心肌炎的重要因素。在早期的研究中，广西医科大学附属第一医院心内科的老师就发现，Pdcd4介导的信号通路在CME引起的炎症可能发挥一个重要的角色。 在研究中，老师们使用 …
阅读更多 »动物实验系列篇章之七—— 实验动物的处死
当实验中途停止或结束时，实验者应站在实验动物的立场上以人道的原则去处置动物，原则上不给实验动物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安乐死。安乐死是指实验动物在没有痛苦感觉的情况下死去。实验动物安乐死方法的选择取决于动物的种类与研究的课题。 一、蛙 类 常用金属探针插入枕骨大孔,破坏脑脊髓的方法处死。将蛙用湿布包住，露出头部,左手执蛙，并用食指按压其头部前端，拇指按压 …
阅读更多 »SCI：调节心肌梗死的关键基因
心肌梗死是通过心肌细胞死亡诱导心脏衰竭一个重要原因。然而，唾液酸在心肌细胞凋亡中的作用机制尚不清楚。最近，大连医科大学的研究人员在关于心肌梗死的研究中发现，唾液酸转移酶siat7a是心肌梗死的重要影响因素。这项研究结果发表在最近的《Basic Research in Cardiology》杂志，可以帮助揭示心肌梗死治疗的潜在靶标。 心肌梗死（myocardi …
阅读更多 »磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤
前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项，并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定？为什么磷酸钙转染并不经济？》比较感兴趣。在这里，对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解，在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享，以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使 DNA 附在细胞表面，这有利于细胞吞入摄取核酸，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …
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