2022年 12月 6日, 星期二
新闻

Tag Archives: 转染试剂

为什么脂质体转染试剂细胞毒性大?

细胞生物学的战友,应该对细胞转染不陌生,没做过也见别人做过。有个问题想跟大家讨论一下,就是脂质体毒性的问题。我们都知道做一次细胞转染不容易,从准备细胞到目的细胞筛选,过程相当繁琐。所以如何提高转染效率成为了关键,但是常用的脂质体转染要求无血清转染,而且有很大的细胞毒性,对转染效率和实验结果都会产生影响,那为什么脂质体转染试剂毒性这么大? 已有众多的文献报道, …

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EXP BIOL MED 2015 : 冠状动脉微栓塞! PDCD4/NF-κB有关?

广西医科大学附属第一医院心内科的老师在临床实践中发现,冠状动脉微栓塞(CME)是急性心肌梗死的常见并发症,发生率约10%~20%,是影响微心肌微循环灌注的主要原因。 NF-κB激活是CME引起的心肌炎的重要因素。在早期的研究中,广西医科大学附属第一医院心内科的老师就发现,Pdcd4介导的信号通路在CME引起的炎症可能发挥一个重要的角色。 在研究中,老师们使用 …

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SCI:调节心肌梗死的关键基因

心肌梗死是通过心肌细胞死亡诱导心脏衰竭一个重要原因。然而,唾液酸在心肌细胞凋亡中的作用机制尚不清楚。最近,大连医科大学的研究人员在关于心肌梗死的研究中发现,唾液酸转移酶siat7a是心肌梗死的重要影响因素。这项研究结果发表在最近的《Basic Research in Cardiology》杂志,可以帮助揭示心肌梗死治疗的潜在靶标。 心肌梗死(myocardi …

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G418筛选转染克隆的注意事项

G418作为稳定转染通用的一种筛选方式,在进行筛选前应该要注意几点: 1.    G418的浓度:G418是一种氨基糖苷类似物,它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度,最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2.  …

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磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤

前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项,并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定?为什么磷酸钙转染并不经济?》比较感兴趣。在这里,对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解,在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享,以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时,可使 DNA 附在细胞表面,这有利于细胞吞入摄取核酸,或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …

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动物实验系列篇章之四——实验动物的除毛、给药方法

一、实验动物的除毛 在动物实验中,被毛有时会影响实验操作与观察,因此必须除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等。 (一)剪毛法:剪毛法是将动物固定后,先用蘸有水的纱布把被毛浸湿,再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛。不可用手提起被毛,以免剪破皮肤。剪下的毛应集中放在一容器内,防止到处飞扬。给狗、羊等动物采血或新生乳牛放血制备血清常用此法。 (二)拔毛法:拔毛 …

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动物体内转染需要哪些条件?

1.每次动物实验,需要准备什么东西,器材? ①转染的核酸,如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。 2.可以转染的核酸都有什么?细胞实验的核酸可以用吗? 可以转染小片断RNA如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要 …

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动物实验系列篇章之五——实验动物的采血法

实验研究中,经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析,故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择,主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。 一、大鼠、小鼠的采血方法 (一)剪尾采血:需血量很少时常用本法,如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作血涂片等可与此法。动物麻醉后,将尾尖剪去约5mm,从尾部向尾尖部按摩,血即从断端 …

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通过转染双链siRNA 在果蝇S2 细胞中进行RNA 干扰

本方案介绍一种通过试剂向果蝇S2 细胞转运siRNA 以触发RNA 干扰的有效方法。本方案适用于24 孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿,需要根据培养孔的表面积换算细胞密度和试剂用量(表1 ) 。 表1 果蝇细胞转染所用细胞, 转染试剂和siRNA (或者ASO) 的体积 培养板或培养皿 24孔 12孔 6孔 6cm 10cm 每孔 …

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如何选择稳定转染的筛选抗生素?

稳定转染和瞬时转染,细胞转染的步骤基本相同,只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天,故在转染12~72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了。稳转细胞系通常需要通过一些选择性标记反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。 通常构建的载体上有两个抗性基因,如,氨苄青霉素和新霉素。那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢? 很多真核表达质粒上都 …

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