病毒感染增强

1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求？ 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体，比如AdMax的Kit C、Kit D等，其总包装的外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体，比如Kit A、Kit B等，外源片断要求小于5 kb。注意，外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、如何提高腺病毒的活性？ 提高 …

       慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装 …

病毒转染原理及步骤   在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。   病毒转染包括以下步骤：1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起 …

在慢病毒滴度测定的倍比稀释实验中，设置复孔主要有以下几个作用： 提高实验数据的可靠性由于生物实验存在一定的随机误差，复孔可以减少实验数据的偶然性，提高测量的准确性和重复性。 计算平均值，减少误差即使计算滴度时可能未直接用到每个复孔的数据，而是取某个稀释度下的阳性孔（如GFP阳性细胞数或抗生素筛选存活细胞数），但通常会计算复孔的平均值，以降低误差。 观察实验一 …

目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过，可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案，有以下两种手段。 1）如果原始 …

慢病毒感染后，细胞不生长可能有多种原因。 以下是一些常见的原因和解决方法： 1) 病毒滴度过高: 原因：高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性，使细胞无法正常生长。 解决方法：降低病毒的滴度，进行一系列稀释实验，找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 2) 细胞状态不佳： 原因：感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法：确保细胞在最佳状态下进行感染 …

慢病毒滴度较低，通常需要较高的 MOI（如 20）才能有效感染，而正常病毒滴度较高，合适的 MOI 可能为 0.1。要将两者放在一起进行比较，可能需要考虑以下因素： 实验目的： 如果关注的是相同数量的感染细胞，可以根据感染效率调整 MOI，以保证相似的感染率。 如果关注的是病毒自身的感染特性，可能需要分别选择最佳 MOI 进行单独实验，再综合分析。 病毒载量 …

一、原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非 …

慢病毒载体的构建： 慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转 …

pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …