英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.细胞密度 一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 还有，尽量选择无 …
阅读更多 »腺相关病毒和其他病毒相比有哪些优势？
腺相关病毒( adeno-associated virus，AAV) 是一类细小病毒，基因组为单链DNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。通常需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。重组腺相关病毒（recombinant AAV, rAAV）是利用AAV2 型基因组与不同血清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体病毒载体，可将目的基因的CDS 区序列或者 …
阅读更多 »直接克隆法构建重组腺病毒基因组
pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …
阅读更多 »体内转染与牛磺酸脱氧胆酸通过Akt通路激活减轻早期脑损伤研究
创伤性脑损伤（TBI）是创伤性死亡和致残的主要原因之一，新的研究表明内质网应激在TBI的病理生理过程中起着重要作用。牛磺脱氧胆酸（TUDCA）是一种亲水性胆汁酸，已被报道为ER应激抑制剂和化学伴侣，并具有抑制细胞凋亡和炎症的潜力。 现分享一篇体内转染（Entranster）与牛磺酸脱氧胆酸通过Akt通路激活减轻早期脑损伤研究的文献，以供参考。
阅读更多 »siRNA转染实验的几点建议
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »RNA转染注意事项
为保证RNA转染的高效率，在转染过程中应注意： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境 …
阅读更多 »Neuropharmacology | 中国药科大学姚文兵教授团队报道：治疗阿尔兹海默症的新视角
姚文兵教授团队在《Neuropharmacology》期刊上发表了“MicroRNA-23b attenuates tau pathology and inhibits oxidative stress by targeting GnT-III in Alzheimer’s disease”的论文，揭示了MicroRNA-23b对阿尔兹海默症 …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与香烟烟雾提取物接触后平滑肌细胞的增殖研究
动脉粥样硬化是发病率和死亡率的主要原因。动脉粥样硬化的特点是血管平滑肌细胞（SMCs）过度增殖，是多种因素联合作用的结果。流行病学调查表明，吸烟与动脉粥样硬化密切相关，在血管平滑肌细胞（SMC）的过度增殖起着关键性作用。现分享一篇ECL发光液（enlight）与香烟烟雾提取物接触后平滑肌细胞的增殖研究的文献，以供参考。
阅读更多 »ECL发光液与TIMP-2对结膜滤过泡疤痕作用研究
滤过术是目前治疗青光眼的主要手术方式之一，功能性滤过泡的形成和维持是其成功的关键。术后伤口愈合包括一系列复杂的动态过程。滤过性手术失败的主要原因是手术区术后成纤维细胞增生、胶原沉积和滤过泡疤痕形成，最终可阻断手术过程中建立的房水引流通道。现分享一篇ECL发光液（Enlight）与金属 …
阅读更多 »siRNA转染至细胞有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
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