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问题1：“感染两天，puro杀3天，5天细胞都长很密” 原因： 细胞分裂快（比如 293T）→ 在5天内即使有筛选，还是会长满。 感染率高 → 很多细胞表达抗性，嘌呤霉素筛选不够“稀释” 建议： 缩短时间：感染 24h 后就加 puromycin，第 2 天开始杀，杀 2–3 天就足够。 更稀释的病毒梯度：推荐加大稀释倍数：1:1000，1:5000，甚至 …

       哮喘是一种和呼吸相关症状有关的慢性气道疾病，如呼气气流受限；预计到2025年，影响哮喘患者总数将达到4亿以上。尽管所有年龄组的哮喘发病率都很高，但老年患者表现出更严重的症状。到目前为止，包括遗传学和环境因素在内的几个因素都参与了哮喘的进展，但哮喘的发病机制在很大程度上还不清楚。过敏性炎症和气道重塑是哮喘的两个基本特征。炎症细胞（主要包括嗜酸性粒 …

AAV，即腺相关病毒载体，属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后，可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点，但AAV不会引起人类疾病。实际上，我们市面常见的AAV并不是野生型AAV，而是重组AAV（rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构（图片来源：Semantic Scholar）     目前来看，rAAV相比较其他病毒载体，未发现 …

      肾小管上皮细胞（RPTECs）占到肾脏体积的90%，是构成整个肾小管间质的主要细胞类型。这些细胞对于肾功能至关重要，RPTECs的任何损伤都会使肌纤维母细胞的积累，进而导致肾小管间质纤维化。据报道，microRNAs（miRs）可以调节肾脏对于急性损伤的反应，有些mirRNA被认为在肾功能的维护和肾损伤的发展过程中起重要作用。现分享一篇体内转染（ …

p53转录调节蛋白与大量细胞内其他信号转导途径相互作用，并且有很多正负自我反馈调节作用于p53反应。p53直接控制由紫外线（UV）导致的POMC /αMSH产物并和非紫外线因素导致的的病理性色素沉着相关。现分享一篇RNA转染（entranster）与SASH1引起病理性色素沉着研究的文献，以供参考。

       小干扰RNA（siRNA）在基因功能研究和药物开发方面扮演着重要的角色。最近，通过化学修饰作用设计出对光不稳定的siRNA，从时间和空间上来阐明基因额沉默过程。现分享一篇体内转染（Entranster）与小鼠基因表达光调控研究的文献，以供参考。

研究背景 GLP1（胰高血糖素样肽-1）在肠内分泌细胞（EECs）中由胰高血糖素原（proglucagon）经PCSK1切割生成，通过刺激胰岛素分泌和抑制胰高血糖素分泌调节血糖。 Nogo-B（Reticulon 4B）是一种内质网（ER）驻留蛋白，在代谢疾病中起重要作用，但其在GLP1生成中的功能尚不清楚。 主要发现 Nogo-B与proglucagon结 …

一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇（或异丙醇） (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 ％青霉素／链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …

卒中尤其是缺血性卒中，可能导致严重的神经功能障碍，甚至死亡，在世界范围内有较高的发病率和死亡率。脑缺血后神经元凋亡、自噬、坏死等形态学变化产生细胞死亡的复杂特征。细胞自噬参与了II型程序性细胞死亡，并且在脑缺血中，自噬作用在累积。自噬作用是复杂的，取决于大脑的成熟度，区域的缺血严重程度等。现分享一篇运用体内转染（Entranster），脑室注射方法研究细胞程 …

       蛋白质-蛋白质相互作用的合理设计是创造新型蛋白质药物、诊断探针或调节细胞信号通路的有力工具。SH3和PDZ结构域等小型模块化支架在调节蛋白质相互作用中起着重要作用，因此这些结构域在蛋白质设计中的应用已被广泛研究。De novo蛋白质设计为工程定制蛋白质功能提供模板，为合成生物学研究提供正交蛋白质相互作用网络。已经开发出各种计算方法来引入已知蛋白 …