英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1. siRNA与转染试剂比例不佳 由于siRNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了siRNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细 …
阅读更多 »嘌呤霉素筛选标记的病毒滴定 Protocol
关于使用嘌呤霉素筛选标记的慢病毒或逆转录病毒进行病毒滴定的 protocol，整理了一个常用且较为权威适用于慢病毒系统： 【嘌呤霉素筛选法的病毒滴定 Protocol】 原理简述： 将病毒感染宿主细胞，使用嘌呤霉素筛选，仅有成功整合了抗性基因的细胞能存活。最后通过计数存活细胞（克隆或整体密度）来估算病毒滴度。 实验材料： 病毒上清； HEK293T 或其他易 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与树突状细胞介导的抗肿瘤免疫研究
黑色素瘤是增长最快的恶性肿瘤，因此是一种最危险的皮肤癌类型。MiRNA（miR）‑128，这是一个公认的抑制肿瘤生长的因子，可参与树突状细胞抗肿瘤作用，然而，mir-128与树突状细胞介导的抗肿瘤免疫功能仍待澄清。现分享一篇mirRNA转染（Entranster）与树突状细胞介导的抗肿瘤免疫研究的文献，以供参考。
阅读更多 »应用多种神经损伤模型探究PRMT6在背根神经节中的作用研究
文章标题：Protein arginine methyltransferase-6 regulates heterogeneous nuclear ribonucleoprotein-F expression and is a potential target for the treatment of neuropathic pain* 《蛋白质精氨酸甲基转 …
阅读更多 »DNA转染（Entranster）与血管生成素-2和肺癌转移研究
肺癌是最常见的恶性肿瘤，血管生成-2（Ang-2）升高，具有高转移率。然而，关于Ang-2促进肺癌细胞增殖和转移的机制仍不清楚。现分享一篇DNA转染（Entranster）与血管生成素-2和肺癌转移研究的文献，以供参考。
阅读更多 »siRNA转染实验注意事项
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »RNA转染与大鼠肺辐射损伤中microRNA和mRNA表达谱研究
暴露与辐射中会引起细胞反应，这可能受到基因表达网络的调控。miRNA是一种小的非编码RNA，通过促进mRNA的降解或抑制蛋白质的翻译来调节基因的表达。在放射性肺损伤中miRNA和mRNA的表达模式还不是很清楚，并且miRNA在这个过程中的作用还未有研究。现分享一篇RNA转染（Entranster）与大鼠肺辐 …
阅读更多 »细胞siRNA转染有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与顺铂耐药的卵巢癌细胞株研究
卵巢癌是妇科恶性肿瘤患者死亡的主要原因。卵巢癌的早期诊断是困难的，但其进展很快。标准治疗是手术切除，其次是铂-紫杉类化疗。然而，传统的手术和化疗的疗效相当差，铂耐药的癌症在六个月内约25%的患者复发，总的5年生存率约为31%。为了提高卵巢癌的生存率，提高患者的生活质量，迫切需要新的治疗靶点，需要更深入地了解耐药的分子机制。现分享一篇ECL发光液（en …
阅读更多 »siRNA细胞转染实验效率低的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
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