转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明,因为RNA …
阅读更多 »动物实验系列篇章之三——实验动物的麻醉方法
麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉,保障实验动物的安全,使动物在实验中服从操作,确保实验顺利进行。 一、常用的麻醉药 (一)常用局部麻醉剂:普鲁卡因,此药毒性小,见效快,常用于局部浸润麻醉,用时配成0.5%~1%;利多卡因,此药见效快,组织穿透性好,常用1%~2%溶液作为大动物神经干阻滞麻醉,也可用0.25%~0.5% …
阅读更多 »体内转染与高温和遗传性雌性牙鲆雄性化过程中GSDF表达研究
在脊椎动物中,性别决定和分化是非常可塑的,取决于遗传和环境影响的结合。温度作为性腺发育早期的一个重要环境因素,可能会凌驾于基因性别决定机制之上,改变许多硬骨动物的表型性别。据报道,尼罗罗非鱼、斑马鱼和日本比目鱼的基因雌性后代在性腺分化的关键时期在高温下被饲养时,已完全性转化为功能雄性。尽管实际的温度依赖性决定机制尚不清楚,但性反转鱼类的一个共同 …
阅读更多 »急性肺损伤中的代谢相互作用
标题:Metabolic Interplay in Acute Lung Injury: PARK7 Integrates FADS1/2-Dependent PUFA Metabolism and H3K14 Lactylation to Attenuate Endothelial Ferroptosis and Dysfunction 期刊影响因子 该研 …
阅读更多 »siRNA转染实验的关键点
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …
阅读更多 »GSDMD C端抗病毒免疫机制研究
文献标题 中文:GSDMD C端在对抗I型干扰素信号中被忽视的作用 英文:The Neglected Role of GSDMD C-Terminal in Counteracting Type I Interferon Signaling 影响因子 该文献发表于 Advanced Science(《先进科学》),该期刊2023年影响因子为 15.1(202 …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想的原因
siRNA转染效率不理想,常见的原因有: 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率 …
阅读更多 »DNA转染与Cep70与γ-微管蛋白和有丝分裂纺锤体组装研究
有丝分裂纺锤体的解除与基因组不稳定性有关,这是肿瘤发生和恶性转化的一个重要方面。为了保证染色体传递的准确性,有丝分裂纺锤体由精细的机制组装,并由动物细胞中的着丝粒组织配制。尤其是,中心体蛋白被认为协同作用以确保准确的纺锤体形成,但分子细节仍有待研究。现分享一篇DNA转染(Entranster)与Cep70与γ-微管蛋白相互作用在有丝分裂纺锤体组装中作用的研究 …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与丹参酮ii-磺酸钠和BKca通道研究
丹参酮ii-磺酸钠(ds-201)是丹参酮ii-a的水溶性衍生物,可诱导血管舒张并激活BKca通道。为了探讨ds-201在BKca通道上的作用机制,现分享一篇ECL发光液(enlight)与丹参酮ii-磺酸钠和BKca通道研究的文献,以供参考。 文献地址:https://www.nature.com/articles/aps201485
阅读更多 »体内转染与microRNA-31对脓毒症大鼠肠屏障功能障碍影响的研究
脓毒症是一种危及生命的临床综合征,其特征是同时存在感染和全身炎症反应。脓毒症的常见临床表现与全身炎症反应综合征和器官功能障碍有关,包括血流动力学不稳定、低氧血症和肠屏障功能障碍。此外,肠道内含有内源性和外源性微生物,据报道,这些微生物是脓毒症的潜在病原体,也可能因脓毒症而易受缺血再灌注损伤。肠屏障功能障碍可导致脓毒症继发性细菌移位和多种器官功 …
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