英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
在自然界中，微生物镰刀菌病原体普遍侵入宿主植物、动物和人类，并且共生次生代谢物真菌毒素。除农业经济损失外，以脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）为例，这些物质通常是对食品安全、动物和人类健康带来严重威胁。虽然全世界对食品中DON阈值的许多规定都是严格立法的，但DON对婴儿、青年和老年人群的毒性和安全限度仍存在相当大的争议，这实际上是由于对DON毒 …
阅读更多 »siRNA转染（Entranster）与YWK-II蛋白/APLP2稳定性研究
YWK-II蛋白/APLP2是一种进化上保守的蛋白家族的成员，包括淀粉样前体蛋白（APP）和淀粉样蛋白前体蛋白（APLP1）。已经表明YWK-II /APLP2在细胞存活方面可作为Müllerian抑制物（MIS）的一种新的G蛋白偶联受体。然而，调节YWK-II /APLP2蛋白的折叠和稳定性的因素尚未确定。现分享一篇siRNA转染（Entran …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与冠状动脉微栓塞相关心功能不全研究
冠状动脉微栓塞（CME）是一种常见的临床事件，可自发或由程序相关的动脉粥样硬化斑块破裂急性冠状动脉综合征患者，特别是在经皮冠状动脉介入治疗（PCI）导致。大隐静脉移植物经皮介入治疗的发生率高达45%。由CME引起的短暂“无血流”或“慢血流”是急性心肌梗死患者长期预后不良的独立预测因 …
阅读更多 »piRNA在蝗虫生殖中调控作用的研究
标题 piRNA-guided intron removal from pre-mRNAs regulates density-dependent reproductive strategy 影响因子 该研究发表在《Cell Reports》期刊上，2022年的影响因子为9.995。 文献概要 该研究探讨了piRNA（Piwi-interacting RNA …
阅读更多 »通过转染双链siRNA 在果蝇S2 细胞中进行RNA 干扰
本方案介绍一种通过试剂向果蝇S2 细胞转运siRNA 以触发RNA 干扰的有效方法。本方案适用于24 孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿，需要根据培养孔的表面积换算细胞密度和试剂用量（表1 ) 。 表1 果蝇细胞转染所用细胞， 转染试剂和siRNA （或者ASO) 的体积 培养板或培养皿 24孔 12孔 6孔 6cm 10cm 每孔 …
阅读更多 »慢病毒感染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
阅读更多 »如何快速实现蝗虫、七鳃鳗、猪等（非小鼠）动物的体内基因敲除/表达？
如何快速实现蝗虫、七鳃鳗、猪等动物的基因敲除呢？ 如果实验室研究人体疾病基因，需要稳定表达时，我们可能会选择基因工程小鼠，但如果课题组研究的是其他哺乳动物，比如猪、蝗虫、鱼之类的，基因工程的工作就相对复杂了。首先要设计基因载体，然后打入靶细胞进行同源重组，再培养细胞、筛选……一套工夫下来，要不目的基因没重组，要不模型全死了。要不找公司做？老牌的公司构建基因工 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）研究囊型包虫病相关蛋白
囊型包虫病（包虫病），是由细粒棘球绦虫引起的一种被忽视的热带疾病，可造成数百万人发病及死亡，同时给全球的畜牧业带来巨大的经济损失。寄生虫中tetraspanin家族蛋白已成为与宿主寄生病状态相互作用的重要分子，也有利于疫苗和诊断试剂的发展。现分享一篇利用体内转染方法（Entranster-in vivo）研究囊型包虫病相关蛋白的文献，此方法新 …
阅读更多 »siRNA转染至细胞有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
阅读更多 »ECL发光液的选择
做western-blot实验时，选择一款好的发光液对实验的成功很重要，否则很容易发生各种问题，如淬灭，背景高，不灵敏，发光时间短等。比如淬灭，我觉得Western Blot“淬灭”的原因主要在两方面：含HRP的抗体和发光试剂。由于长期应用某种发光试剂，人们多注意了抗体，不知道发光试剂其实也会对实验结果造成 …
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