细胞生物学

DNA转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质 …

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是： 对于0.2 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为130V， 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μ …

       已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777 …

1.转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2.RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA和 …

不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …

G418作为稳定转染通用的一种筛选方式，在进行筛选前应该要注意几点： 1.    G418的浓度：G418是一种氨基糖苷类似物，它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度，最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2.  …

根据你的描述，GFP在第一天有很好的表达，但在第二天转染DNA质粒后，第三天绿色荧光消失，只有少数细胞有红色荧光。这可能涉及到几个不同的因素： 1. DNA质粒表达对GFP表达的抑制 高浓度DNA引起的翻译抑制：你已经电转过mRNA，然后再转DNA质粒，这可能引发细胞对大分子DNA的免疫反应，比如激活干扰素反应。这可能抑制了翻译，不仅影响红色荧光蛋白（DNA …

单独电转mRNA（GFP）信号很好，但一旦同时把DNA一起电转，GFP荧光显著下降。这个往往不是“挤占表达资源”这么简单，更多是由“电转参数 + 细胞先天免疫反应 + 总核酸/盐负载”三方面共同导致。给你一个可操作、优先级排序的排障与优化清单（不需要额外设备就能尝试）： 先做两件最快见效的事 把DNA量往下砍 10–100×（起始试 10 ng～100 ng …

文献标题 英文：An orthogonal CRISPR/Cpf1 platform for precise spatiotemporal gene regulation and osteoporotic fracture repair 发表期刊： Cell Reports Methods 发表时间： 2026年2月23日 (卷6, 文章编号 101299) …

       对于难转染的细胞的转染，如何提高转染效率的问题也是目前研究的技术难题。一般建议使用电转的方法，但是由于电转的方法对细胞损伤比较大，该方法也未必是最佳的。推荐Entranster-E电转染试剂，可将电击对细胞的损伤降到最低。转染效率的确定，常用的是流式细胞仪检测的方法。