细胞生物学

1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …

这是一个很重要也很实际的问题——瞬时转染效率是RNA干扰或质粒表达实验中一个关键变量，但很多人低估了它对结果的影响。 问题核心： 你说得非常对： “荧光镜下看感觉无法量化和保证每个组别的转染效率完全一致。” 用荧光镜看确实是定性评估，不够准确，且不同组别（尤其不同处理条件）可能转染效率不同，导致后续敲低效率、蛋白表达等结果不具可比性。 几种常见的转染效率评估 …

培养基可用来有意识地从混合细胞群体中筛选特定性质的哺乳动物细胞。 材料 脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞(10: 1) 含10 ％胎牛血清 的RD 培养基 4X10-5mol/L 氨基喋呤(A 液；用0. 1mol/L NaOH 配制成100 倍浓缩液） 1X10-5mol/L 次黄嘌呤／ 1. 6 X 10-3 mol/L 胸腺嘧啶脱氧核苷，双蒸水配制( …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下shRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

体外培养细胞的增殖特点 从培养时开始，培养物可从组织块培养的外迁细胞中获得，也可通过酶消化或机械方法分散组织获得。不管采用何种方法获得细胞，原代培养是一系列细胞选择过程的第一步，其最终结果是产生一个相对均一的细胞系。细胞从组织块培养中迁移出来的能力是选择的条件之一； 而对分散的细胞来说，只有那些在离散后黏附到了培养器皿底面上生存下来的细胞， 或悬浮时能存活的 …

基质凝胶培养是研究细胞与细胞、细胞与基质之间相互作用的重要方法，如细胞运动性、肿瘤细胞的侵袭转移能力的研究。现在应用最广泛的凝胶为I 型鼠尾胶原，其他还有纤维蛋白胶原、血浆胶原等。 （一）材料与设备 胶原凝胶I (collagen I) 、完全培养液、培养皿（直径35mm)、吸管、移液枪、CO2 培养箱。 （二）操作步骤 1．用完全培养液调节胶原凝胶的浓度为 …

文献标题 《FoxO1 Responses to Chronic Oxidative Stress to Participate in Age-Related Osteoporosis by Depriving β-Catenin From TCF7》 （FoxO1通过从TCF7中剥夺β-Catenin参与年龄相关性骨质疏松症的反应机制） 影响因子 期刊为 …

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …

下述方案描述的是采用胰蛋白酶处理细胞，进行细胞的传代或收集。维持细胞系的方法通常为每周传代一次，在传代的前一天换培养液；但是某些细胞系需要更频繁的传代。每种细胞系应单独传代以免细胞系交叉污染。超净工作台内不能同时放置一个以上细胞系。 吸干培养单层细胞的细胞培养瓶或培养皿中的培养液。 加入0.05％胰蛋白酶工作液(T-25 细胞培养瓶加入1ml; T-75 细 …

siRNA转染效率不理想，常见的原因有：1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总 …