分子生物学

1、巣式pcr（Nest-PCR）可增加稀有靶序列的灵敏度；降低了扩增多个靶位点的可能性；提高PCR特异性 2、递减PCR（Touch Down PCR）：前几个循环使用严谨的退火条件提高特异性；循环设在比估算的Tm高大约5℃的退火温度下开始，然后每个循环降低1-2℃，直到退火温度低于Tm 5℃ 。适合用于AFLP、DNA指纹分析等。 3、热启动PCR：抑制 …

什么时候使用无菌技术？ 当必须进行无菌操作时。无论什么时候在进行活的有机体实验或是为进行活体实验而准备培养基、缓冲液、培养容器等时，必须使用无菌操作技术，例如： · 准备转化用的大肠杆菌培养物 · 制备LB 平板培养基 · 分装细胞 · 过滤培养基的血清 · 打开和溶解冻干细菌 在无菌操作有帮助的情况下。如果不想容器或是区域中的物质进入另一个容器或是区域时， …

在慢病毒感染后72小时感染效率较低、细胞已经长满的情况下，可以尝试以下几个措施来提高感染效率并优化实验条件： 细胞传代或重新播种：如果细胞已经长满（汇合度较高），可能会影响慢病毒的感染效率。可以将细胞进行传代，重新播种在新的培养板上，使其达到较低的汇合度（例如30-50%），然后再进行感染。 优化感染时的MOI（Multiplicity of Infecti …

本方案用于设计特异性抑制细胞内miRNA 功能的反义寡核昔酸（ASO ) 。2′-O－ 甲基化修饰的反义寡核苷酸（ ASO ) 可以增加其有效性和抗降解能力， 然而3’端胆固醇修饰可以促进ASO 进入细胞内。 设备 连接互联网的计算机 方法 1 从miRBase ( http://rnicroma.sanger.ac. uk/sequences …

  大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。 1原理： 质粒DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。 2器材： 旋 …

siRNA（small interfering RNA, 小干扰RNA）并不是从牵牛花的过表达现象中发现的，而是从研究植物基因沉默和RNA干扰现象中逐步发展起来的。siRNA的发现归功于对基因沉默和RNA干扰机制的研究，尤其是科学家在植物、真菌和线虫等生物中对这些现象的观察和研究。 siRNA发现的关键研究 植物基因沉默：在植物中，科学家观察到特定基因可以在 …

透析被用于从样品中除去盐和其他杂质，样品被放置在一个多孔的透析袋中，只允许比孔小的分子流出。透析袋被放在大体积的水或者缓冲液中，允许内容物外流，最后通过透析缓冲液把透析袋中的缓冲液取代。透析袋在使用前要洗净，所有的操作都要带手套。1. 根据合适的分子量截留选择透析袋。2. 准备透析袋，做成一个口袋，4’C 储存。3. 将透析袋放在一个大体积的烧杯 …

工作区域尽可能地远离通风口和交通口。不应该开窗工作，也不要靠近门口。通风橱能够帮助无菌状态的保持，但它也不一定完全保证。 确保整洁的工作环境。拿走所有不用的仪器和设备，旧容器和箱子也不要放在近处，做完实验后，收拾干净实验台。 实验前用消毒剂或是清洁剂清洁工作区域。70 ％的乙醇是最常用的（但也要根据不同实验室的情况决定，因为酒精不一定对那些特殊的污染物有效） …

近些年来，随着PCR 技术的出现，以及DNA 克隆和测序方法的发展，对大量质粒载体和重组子的需求也大大减少。因此，本方案曾一度广泛应用，但已经被更为快速和简便的柱纯化方法代替。在本方案中，通过碱裂解法的放大( Bimboim and Doly 1979 ) ，质粒DNA 可从清亮的细菌裂解物中通过含有溴化乙锭的CsCl 梯度离心来进行纯化。 无论是高拷贝数的 …

本方案描述了将ASO 转入果蝇S2 细胞以便抑制miRNA 功能的方法。通过检测miRNA靶蛋白水平或miRNA 靶基因3UTR 报道基因的活性，可以检测ASO 对miRNA 的效应。本方案是针对24 孔板设计的，若用其他多孔板、培养瓶或不同直径培养皿，应根据其表面积计算细胞密度和试剂体积 。 试剂 ASO （ 12.5μmol/L ) 和错配和/或无关对照 …