英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
这年头，学生物的不会做个ELISA，都不好意思出门。做ELISA 容易，把ELISA 做好至少要掌握以下几点： 如何选择合适的阳性对照? 阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致，一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，加入一定量的待检物质。比如，以人血清为标本的测定，阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品。 如何选择合适 …
阅读更多 »细胞转染效率不可重复怎么办？
转染效率重复性差原因： 细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 细菌污染。可使用Entranster试剂，培养基可加抗生素，避免细胞污染。 细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 血清质量不稳定。用同一批号的血清。
阅读更多 »悬浮细胞难转染怎么办？
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作 …
阅读更多 »RNA转染效率低的原因
RNA转染效率低，可能的原因： · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。
阅读更多 »RNA转染效率低的原因
RNA转染效率低，可能的原因： 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster-R4000，纳米材料，毒性低，效率高。 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 检测时间有问题。适当调整检测时间。 RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。 &nbs …
阅读更多 »如何提高病毒感染细胞实验效率？
可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率，下面以慢病毒为例，说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …
阅读更多 »DNA质粒转染注意事项
1， 质粒的构建：启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。 2， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的 …
阅读更多 »细胞转染实验方法有哪些？
1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …
阅读更多 »如何做好细胞电转染实验？
要想做好细胞的电转染实验，应注意以下几点： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择 …
阅读更多 »体内转染（entranster）与GSDMD在I/R损伤中的作用及可能的潜在机制研究
尽管缺血性中风是全世界死亡的主要原因之一，但缺血再灌注（I/R）脑损伤的致病机制仍不清楚。消皮素D（Gasdermin D，GSDMD）是caspase-11（非异常炎症体）和caspase-1（典型炎症体）下游的热致死亡执行的重要因素，可能与I/R损伤有关。现分享一篇体内转染（entranster）与GSDMD在I/R损伤中的作用及可能的潜在机制研究的文献 …
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