英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、 …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与AMPA受体和巨噬细胞中TNF-α的表达和释放研究
谷氨酸（Glu）是中枢神经系统中一种兴奋性神经递质，并根据其特定的谷氨酸受体发挥多种功能。谷氨酸也是一种营养氨基酸，存在于血液中。谷氨酸受体有两组，它们是离子型受体（IGLURs）和代谢型受体（MGLURs）。IGLURS是根据其对激动剂的选择性分为三个亚型：N-甲基-D-天门冬氨酸受体（NMDA），A-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸 …
阅读更多 »细胞转染实验的方法有哪些？
1. 电穿孔法。通过短暂的高电场电脉冲处理细胞，沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。DNA被认为是穿过孔扩散到细胞内的。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要，因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说电穿孔法可用于各种细胞，且不需要另外采购特殊试剂，但需要昂贵的电转仪。此法每次转染需要更多的细胞和DNA，因为细胞的死亡 …
阅读更多 »siRNA转染时细胞铺板密度为什么很重要？
RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高，一些试剂由于本身毒性的影响，太低的细胞数量时毒性明显，所以会要求较高的细胞密度（汇合度），顺便说一句，看一个转染试剂的 …
阅读更多 »细胞RNA转染的几点建议
为了做好RNA转染实验，提出几点关于细胞RNA转染实验的建议，供大家参考： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »RNA转染实验效率低的原因
RNA转染效率低，可能的原因： · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster-R4000，纳米材料，毒性低，效率高。 · 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细 …
阅读更多 »进行电转染实验时，DNA有什么要求？
使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素，OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA，因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围 …
阅读更多 »电转染实验时，DNA有什么要求？
使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素，OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA，因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围为1-5 mg/ml。使用浓度较高的DNA可能会导致与细胞不均匀 …
阅读更多 »动物体内转染实验的重复性/可靠性如何？
运用体内转染试剂Entranster进行动物体内实验时，实验的重复性或可靠性和整体的实验分不开，如果基础实验（比如细胞实验）充分，而且又有其他的方法进行印证，那么实验的可靠性就很高，这时动物体内转染就不需要太多动物，几十只动物，能说明问题就可以。但如果其他的实验较少，单纯用一种方法进行实验，就需要排除实验过程的客观因素的影响，比如动物本身的差异，比如实验过程 …
阅读更多 »Hela细胞转染后几小时死亡怎么办？
可能有多种原因： 目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡； 转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害； 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议： 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统； 摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考 …
阅读更多 »