可通过以下几个方面进行改进: 1. 可减少蛋白上样量; 2. 降低一抗二抗稀释度,减少抗体孵育时间; 3. 如果背景深的话,则要把发光液沥干些再压片;如果背景不深则需减少发光时间和显影时间。 4.选择合适的发光液,比如Enlight。
阅读更多 »细胞电转染实验过程中的影响因素
1 电场参数 电场是电转染的重要因素,细胞在电场的作用下,膜通透性增加或是形成小孔,以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此,一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值,其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外,还可以 …
阅读更多 »实验室安全对 EB say “NO”
做过核酸电泳的应该都知道核酸染料。每次电泳前将核酸染料与融化的琼脂糖凝胶混合制板,凝胶凝固后即可进行电泳,前染有利于节约时间。现在实验室用的核酸染料大部分应该都是安全的了,EB的替代品都纷纷登场了。 EB,即溴化乙锭。EB属于核酸分子嵌入剂,早年间常用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料。EB本身在紫外下不发光,能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光 …
阅读更多 »细胞转染实验的方法有哪些?
电穿孔法。通过短暂的高电场电脉冲处理细胞,沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。DN被认为是穿过孔扩散到细胞内的。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要,因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说电穿孔法可用于各种细胞,且不需要另外采购特殊试剂,但需要昂贵的电转仪。此法每次转染需要更多的细胞和DNA,因为细胞的死亡率高。每 …
阅读更多 »如何优化RNA转染条件?
可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …
阅读更多 »电转染实验过程影响因素
1 电场参数 电场是电转染的重要因素,细胞在电场的作用下,膜通透性增加或是形成小孔,以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此,一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值,其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外,还可以 …
阅读更多 »能否用384孔板进行CCK8试验?
可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK8 溶液,如果加入的CCK8体积太少,可以先将CCK8溶液稀释1 倍,然后加入培养基体积20%的量。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »电转染实验注意事项
1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   …
阅读更多 »如何做好细胞转染实验?
1.选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »动物体内转染试剂的作用原理是什么?
体内转染试剂Entranster-in vivo通过纳米技术合成,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分,由于处于纳米尺度,粒径小,不易引起免疫反应,不影响动物和器官组织的功能,可以多次在同一动物注射。
阅读更多 »
英格恩生物技术博客 生物实验干货分享