1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸,葡萄糖),维生素,无机盐,和缓冲物质。有些成分非常不稳定,因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »CCK8对于不同的细胞,灵敏度是否一样?
不一样,悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞,一般加入CCK8 培养1-4 小时吸光度已经很高,但对于悬浮细胞则可能吸光度较低,可以通过延长CCK8 的加入时间或增加细胞数量来解决。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击cuturl(‘https://www.engreen.co …
阅读更多 »Hela细胞转染后出现死亡的原因及解决方法
可能有多种原因: 目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡; 转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害; 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议: 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统; 摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考 …
阅读更多 »怎样纯化信号通路关键性酶?
随着老龄化的不断加剧,癌症逐渐成为威胁人类生命和健康的最可怕的敌人。为检测药物对肿瘤信号通路关键酶的作用,实验中经常通过基因重组技术,获得大量的外源性蛋白,并通过体外酶活检测来筛选化合物,为细胞水平和体内检测提供很好的基础。下面就如何纯化肿瘤信号通路关键性酶进行简单的介绍。 1、获得重组质粒 1)通过查阅文献或者资料,找到目标蛋白存在的细胞类型以及序列的CD …
阅读更多 »电转染实验时,DNA有什么要求?
使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素,OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA,因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围 …
阅读更多 »CCK8实验时,如果OD值太低,可以采取什么办法?
可以采取2个办法:① 适当增加细胞数量。② 延长加入CCK8试剂后的染色时间。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »western-blot实验常见问题及解决方案
常见问题 解决对策两块玻璃板之间灌胶,胶总是不平 玻璃没有洗干净,应该洗得很干净 …
阅读更多 »从面部识别到行走姿势:解密支付系统的生物识别技术
据科技媒体TechCrunch.com报道,面临着越来越复杂的网络袭击以及各式各样的信用卡诈骗,支付系统产业正尝试将各种生物识别技术加入它们的系统,以加强安全,防止入侵。 根据最近报道,万事达卡正在推出以智能手机“自拍照”验证的面部识别支付服务。目前这个项目正在测试当中。虽然现在用户们仍需同时使用密码,但是不久的将来,仅“自拍照”将足以完成支付。万事达卡表示 …
阅读更多 »提高细胞DNA转染效率的要点
1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸,葡萄糖),维生素,无机盐,和缓冲物质。有些成分非常不稳定,因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »电转染实验需要注意的事项
1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺 …
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