其它

1.        选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.       …

转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …

       首先siRNA由于只有二十几个碱基对，相比DNA几千上万对碱基，小了许多。目前大多数转染试剂都针对比较大的质粒DNA，而非小的RNA分子。用于转染DNA的转染试剂和方法并不完全适用于转染siRNA。     其次，siRNA转染比DNA转染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果，这对 …

荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象，即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光，但亮光很快就消逝了，压完片后条带却很弱，甚至没有条带，发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带 …

1.       样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2.       凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …

RNA转染效率低，可能的原因： 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。

       不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK8 培养1-4 小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK8 的加入时间或增加细胞数量来解决。 如需了解更多关于cck8产品的信息，请点击cuturl(‘https://www.engreen.co …

1.细胞密度 　　一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 　　这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 　　还有，尽量选择无 …

转染效率重复性差原因： 细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 细菌污染。可使用Entranster试剂，培养基可加抗生素，避免细胞污染。 细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 血清质量不稳定。用同一批号的血清。

(一)碱裂解法提取质粒 [实验原理] 碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复Ph至中 …