英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
细胞电转染实验效率低的原因一般有以下几点： 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d …
阅读更多 »siRNA转染效率低的原因有哪些？
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »siRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »揭秘RNAi，缔造实验神话
用siRNA进行transient transfection不稳定，几代细胞以后，症状就会消失，所以在转染几天（1-3）后要立刻抽提蛋白，进行分析。 用质粒中的shRNA进行转染，如果质粒含有抗生素位点，可以进行筛选，获得较稳定的细胞株系，但需要时间较长 用病毒中的shRNA进行感染（infection），抗生素筛选后，可以获得很稳定细胞株系。 瞬时RNAi …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与猪繁殖与呼吸综合征病毒与胆固醇-25-羟化酶研究
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种免疫调节性病原体，已被公认为调节宿主干扰素（IFN）系统。胆固醇-25-羟化酶（CH25H）是一种重要的干扰素刺激基因（ISG）编码多面体膜蛋白，显著抑制许多病毒的复制。最新研究表明，CH25H抑制PRRSV的复制，同时PRRSV的感染可显著下调CH25H的表达，但涉及CH25H下调的病毒蛋白尚不清楚。现分享一篇EC …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与小胶质细胞活化防止脑缺血损伤研究
缺血性中风是导致全球范围内死亡和残疾的主要原因之一，是一个重大的公共卫生问题。为了阐明了缺血性脑损伤的病理机制，科研人员付出了巨大的努力。为此，针对中风引起的神经炎症是治疗中风的一个有吸引力的策略。现分享一篇体内转染（Entranster）与小胶质细胞活化防止脑缺血损伤研究的文献，以供参考。
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与树突状细胞相关miRNA调节研究
表观遗传修饰在基因表达调控中起关键作用。为了了解表观遗传修饰在不同的环境中如何改变单核细胞来源的树突状细胞（DC）miRNA的表达，现分享一篇RNA转染（Entranster）与树突状细胞相关miRNA调节研究的文献，以供参考。
阅读更多 »动物实验系列篇章之六——实验动物各种体液、骨髓的采集方法
一、消化液的采集 (一) 唾液 1. 直接抽取法 在急性实验中， 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液，此法非常简单，但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。 2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液，要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外，即以腮腺导管为中心，切成一直径约2～3cm的圆形粘膜片，将此粘膜片，与周围组织分开，穿过皮肤切口引到颊外,将带有导 …
阅读更多 »DNA转染与bom-mir-2805在上调家蚕纤维蛋白轻链基因的表达研究
家蚕是世界上最重要的经济昆虫，也是鳞翅目重要的模式生物。家蚕丝腺是一种高度特异性，具有高效合成丝蛋白能力的特殊器官。丝蛋白主要由丝素和丝氨酸组成。丝素基因的表达主要在转录水平上受到时间和空间调控，表现为表达抑制模式。研究表明家蚕miRNAs参与丝蛋白基因的表达调控。另外，家蚕丝腺特异性转录因子（Tfs）如丝腺因子（SGF，包括SGF-1、SGF- …
阅读更多 »体内转染与LncRNA AK016739抑制成骨细胞分化和骨形成研究
中老年妇女绝经后骨质疏松症研究的发病率为50%，然而现有疗法的效果并不理想。新的证据证明长非编码RNA（lncrnas）与多种生理和病理过程相关，包括发育、致癌和骨的形成。然而，有关lncRNAs调节骨形成的报道相对有限。现分享一篇体内转染（entranster）与LncRNA AK016739抑制成骨细胞分化和骨形成研究的文献，以供参考。
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