英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.用于慢病毒感染的细胞接种量是多少？ 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量，以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。 针对大部分细胞系：传代周期在2-3天，感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右，则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右； 针对某些原代细胞： 由于细胞增长缓慢，可以在接种时提高汇合度到50%～60%，但要确保在感染后4天时细胞 …
阅读更多 »慢病毒倍比稀释测定活性的实验中，DAY2天时，把稀释好的病毒和细胞孵育过夜时，用把细胞原培养基吸取出去吗，还是直接把病毒液添加进去？
好问题！在进行 慢病毒倍比稀释测定病毒滴度（titer） 的时候，DAY2 加入病毒时是否更换培养基，确实是一个关键点，对感染效率有一定影响。下面是两种常见操作方式，以及推荐做法： 推荐操作：先吸掉培养基，再加病毒（常规做法） 流程简述（以DAY2为节点）： DAY1：铺板细胞（如293T、HEK293，常用于测滴度）； DAY2：感染操作 吸掉旧培养基； …
阅读更多 »什么是腺病毒载体？
腺病毒属于腺病毒科，分为两个属：禽腺病毒属（鸟腺病毒）和哺乳动物腺病毒属（人、猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒）。这些病毒均携带一个线性双链DNA 基因组，由直径为70~100mm 的二十面体衣壳蛋白包裹。约36kb 的基因组包括4 个提供调控和复制功能的早期转录单位(El 、E2 、E3 、E4) 、2 个延迟早期单位(IX 和IVa2)和1 个指导包括 …
阅读更多 »PD-1沉默削弱CAR-T细胞抗肿瘤功能
文献标题 PD-1 silencing impairs the anti-tumor function of chimeric antigen receptor modified T cells by inhibiting proliferation activity 影响因子 8.676（Journal for ImmunoTherapy of Cance …
阅读更多 »慢病毒滴度测定的倍比稀释实验中，设置复孔的作用?
在慢病毒滴度测定的倍比稀释实验中，设置复孔主要有以下几个作用： 提高实验数据的可靠性由于生物实验存在一定的随机误差，复孔可以减少实验数据的偶然性，提高测量的准确性和重复性。 计算平均值，减少误差即使计算滴度时可能未直接用到每个复孔的数据，而是取某个稀释度下的阳性孔（如GFP阳性细胞数或抗生素筛选存活细胞数），但通常会计算复孔的平均值，以降低误差。 观察实验一 …
阅读更多 »为什么选择AAV作为基因治疗的病毒载体？
AAV，即腺相关病毒载体，属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后，可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点，但AAV不会引起人类疾病。实际上，我们市面常见的AAV并不是野生型AAV，而是重组AAV（rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构（图片来源：Semantic Scholar） 目前来看，rAAV相比较其他病毒载体，未发现 …
阅读更多 »慢病毒感染，胶体金测出来很高，可感染效果很差的原因
慢病毒感染效率低，尽管用胶体金测试显示滴度很高，可能有以下几个原因： 病毒颗粒质量：虽然胶体金检测显示病毒滴度很高，但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损，无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异：胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量，但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒（感染性单位）可能比实际检测的数量要低 …
阅读更多 »直接克隆法构建重组腺病毒基因组
pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …
阅读更多 »如何利用好慢病毒感染的原理和特点？
一、原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非 …
阅读更多 »慢病毒感染与PD-1和嵌合抗原受体修饰的T细胞抗肿瘤功能研究
嵌合抗原受体修饰的T（CAR-T）细胞对血液恶性肿瘤具有很强的抗肿瘤活性。然而，将这一成功转化为实体瘤仍然令人沮丧。在实体瘤的治疗中，CAR-T治疗面临着免疫抑制环境等巨大困难。在抑制环境的建立中，程序性死亡因子-1（pd-1）/程序性死亡因子配体1（pd-l1）轴被认为起关键作用。现分享一篇慢病毒感染（envirus）与PD-1和嵌合抗原受体 …
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