细胞生物学

材料 装在冷冻培养瓶中的细胞： BS-C-1  、CV-1  、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞 70% (VIV) 乙醇 起始和维持培养基（表1) ， 37°C PBS （可选） 胰蛋白酶／EDTA： 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶／0. 02% (m/V) EDTA, 37℃ 25 cm2和150 cm2组织培养瓶 湿润的、37°C 、5% …

文献标题 Highly efficient prime editors for mammalian genome editing based on porcine retrovirus reverse transcriptase （基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物） 影响因子 14.9（Trends in Biotechnology，20 …

Q1: 一个孔中应接种多少个细胞？ A1: 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。   Q2: 能否用3 …

电穿孔效率受以下几种因素的影响： 外加电场的强度。电压过低，培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过； 电压过高，细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系， 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔， 20% ～ 50％的细胞能够存活（根据台盼蓝拒染法的检测结果） ( Patterson 1979; Baum et al. …

细胞类型： 不同细胞系对慢病毒的感染效率不同。例如，一些细胞对病毒更敏感，需要更低的病毒量和细胞密度。 敏感细胞系（如HEK293T）：种植密度可稍低； 难感染细胞系（如原代细胞）：需要更高密度。 病毒滴度： 如果病毒滴度高，细胞密度可以稍低。 如果病毒滴度较低，建议适当提高种植密度，并配合 增强试剂（如Envirus-LV） 提高感染效率。 LV感染目标： …

原则上可以，具体要看以下几个条件： 步骤可行性： 分别包装：在293T细胞中分别转染两种构建（比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体），收集病毒上清； 浓缩：超速离心或PEG浓缩，两种病毒分别处理； 混合感染：感染前混合两种浓缩后的病毒，用于感染小鼠CD8+ T细胞。 技术要点： T细胞激活：CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染，通常需要先用 …

一、生物学与分子机制相关原因 1️⃣ 负反馈调控 (feedback regulation) 某些基因被抑制后，会触发细胞的代偿机制。 例如，目标基因下调后，上游转录因子或信号通路被激活，从而 反向上调目标基因 的转录。 特别常见于信号通路核心分子（如 MAPK、PI3K、NF-κB、p53 等）的 knockdown 实验。 建 …

1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构 …

在慢病毒感染后72小时感染效率较低、细胞已经长满的情况下，可以尝试以下几个措施来提高感染效率并优化实验条件： 细胞传代或重新播种：如果细胞已经长满（汇合度较高），可能会影响慢病毒的感染效率。可以将细胞进行传代，重新播种在新的培养板上，使其达到较低的汇合度（例如30-50%），然后再进行感染。 优化感染时的MOI（Multiplicity of Infecti …

1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 在开 …