分子生物学

常见问题 解决对策   两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平 玻璃没有洗干净，应该洗得很干净 过硫酸铵和TEMED加量相对较多 加完试剂后应摇匀            总是漏胶 避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损 将两块玻璃板摆放对齐，底部处于同一平面 膜上有明显气泡 操作时将气泡完全排除 靠膜一侧的滤纸应铺平   特异性低 优化一抗 提高一抗和 …

一、实验材料、试剂、仪器耗材： 人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色体细胞标本指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20等恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、Nikon E-400荧光显微镜、盖玻片、封口膜、200μL移液器、暗盒等 二、相关溶液的配制 （1）20×SSC：175.3 g NaCl，88.2 g柠檬酸钠，加水至1 00 …

在亲和层析纯化抗体后，通常需要添加稳定剂以保护抗体免受降解。常见的稳定剂包括甘油、糖类（如蔗糖或海藻糖）、以及醇类（如乙醇）。添加这些稳定剂的目的是增加抗体的稳定性，特别是在长期保存或反复冻融过程中。以下是常用稳定剂的添加浓度建议： 1. 甘油 (Glycerol) 甘油常用于抗体溶液的冷冻保存，以防止冰晶形成和蛋白质变性。推荐添加浓度为： 最终浓度：10- …

结肠巨噬细胞内NLRP3炎症小体的异常激活与溃疡性结肠炎的发生发展密切相关。虽然靶向NLRP3炎症小体被认为是一种潜在的治疗方法，但其调节肠道炎症的潜在机制仍存在争议。 2021年3月9日，发表于Acta Pharmaceutica Sinica B（影响因子11.413）的一篇题为Lonicerin targets EZH2 toalleviate ulc …

大多数蛋白质凝胶电泳是还原性条件下的十二烧基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE) 。 ＊样品准备 还原试剂2－巯基乙醇或者二硫苏糖醇加在变性胶的样品缓冲液中，还原蛋白质中的二硫键，确保蛋白质维持在测定分子量所需的无规则卷曲状态。 样品缓冲液分成小管，贮于－20℃ 。甘油浓度很高，足以防止样品冻结，所以不必担心冻融所造成的损伤。当管中没有还原试剂的味 …

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一 …

1.       样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2.       凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …

计算蛋白质设计（Computational Protein Design）是一种利用计算机算法来设计具有特定功能和结构的蛋白质分子的方法。该领域的目标是通过计算预测蛋白质的结构与功能关系，以设计出符合特定需求的全新蛋白质或优化已有蛋白质，应用广泛于药物开发、酶工程、生物材料等领域。 计算蛋白质设计的核心步骤 确定设计目标：首先明确蛋白质设计的目标，例如设计具 …

Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。 1.收集蛋白样品(Protein sample preparation) 使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。 2. 电泳(Electrophoresis …

在Maxam 和Gilbert 发展的DNA 化学测序法(1977, 1980) 中，碱基专一性化学试剂在一种或两种特定核苷酸位置上随机断裂已纯化的3’端或5′ 端标记的DNA, 产生4 套寡聚脱氧核糖核苷酸。因为只有末端标记的DNA 片段才能在测序胶的放射自显影图中显示出来，所以只能观察到含有固定末端的片段，这样就产生了4 列DNA …