核酸基因

在进行大多数RNA 分析之前， RNA 定量是一种重要和必需的步骤。RNA 定量方法可以分为两类：紫外(UV) 分光光度法，此方法基于嘌呤和嘧啶碱基的吸收光谱； 基于荧光染料的方法，结合到核酸时选择性发荧光，测定荧光染料的强度。如果RNA 样品是纯的（ 如没有诸如蛋白质、酚、琼脂糖或其他核酸的污染），用UV 分光光度法测量被碱基吸收的UV 射线简单而且精确。 …

siRNA转染后目标基因不降反升的现象可能由多种原因引起，常见的因素包括： siRNA设计不合理： siRNA的靶点选择不佳，未能有效靶向目标基因的mRNA，导致抑制效果差或反而激活了基因表达。可以尝试设计不同的siRNA靶点或使用更为优化的siRNA工具进行设计。 转染效率问题： 低转染效率可能导致siRNA无法进入足够多的细胞，从而未能有效抑制目标基因。 …

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一 …

一、 实时荧光定量PCR技术是一种新型的科学定量方法，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。   该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。 二、 目前，荧光定量PCR所使 …

在Maxam 和Gilbert 发展的DNA 化学测序法(1977, 1980) 中，碱基专一性化学试剂在一种或两种特定核苷酸位置上随机断裂已纯化的3’端或5′ 端标记的DNA, 产生4 套寡聚脱氧核糖核苷酸。因为只有末端标记的DNA 片段才能在测序胶的放射自显影图中显示出来，所以只能观察到含有固定末端的片段，这样就产生了4 列DNA …

1. 如何有效设计引物 （1）使用Oligo或Primer设计引物，在保守区内设计，长度一般在18-27bp，上下游引物Tm值最好是60-75℃，GC含量=40%-60%，引物自身及引物之间不应存在互补序列，避免发夹结构。 2. PCR电泳无扩增条带 （1）酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的 …

小量制备可以从细菌培养物中抽提和分析，离心机12 或16 管足够一次制备。 一、材料 5 ml 过夜培养细菌培养物。使用LB培养基加入合适的抗生素培养单克隆菌体，37’C 振荡培养 灭菌的微桩离心管 冰 溶液I （裂解缓冲液， 25 mmol/L Tr的HCI pH8.0, 50 mmol/L葡萄糖， 10 mmol/LEDTA) ，冰上预冷 溶 …

分子克隆最基础的操作可能就是核酸纯化了。去除蛋白质的关键步骤经常是简单地利用酚：氯仿和氯仿把DNA 从水相中萃取出来。这种萃取可在进行一步法克隆操作前有效灭活和去除蛋白酶。然而，如果是从复杂分子混合物如细胞裂解液中纯化DNA 时，则需要更多的检测。在这些情况下， 一般是在用有机溶剂萃取前，利用蛋白质水解酶如链霉菌蛋白酶或蛋白酶K （表1 ) 去除大部分蛋白质 …

一、原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而将在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的RNA探针进行反应。 用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 二、仪器与试剂 仪器：  恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器 …

[实验原理] 当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用 …