核酸基因

1. 无Ct值出现 检测荧光信号的步骤有误: 一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。 引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性。 模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。 模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。 Ct值出现过晚（Ct>38） 扩增效率低: 反应条 …

一、 实时荧光定量PCR技术是一种新型的科学定量方法，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。   该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。 二、 目前，荧光定量PCR所使 …

用仲丁醇（ 2 －丁醇）或正丁醇（ 1 － 丁醇）等溶剂萃取水溶液时，部分水分子会进入有机相，而核酸依然留在水相。重复抽提几次后可显著减少核酸溶液的体积。这一浓缩方法可用于减少稀溶液的体积，以使核酸易于通过乙醇沉淀得到回收。 试剂 DNA 样品     异丁醇 方法 计算核酸溶液体积，在2 5 °C 下加入等量的异丙醇。轻微、充分混匀两相。 加入过多的异丙醇 …

【实 验 原 理】 磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法。磷酸钙有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞，被转染的DNA可以在细胞内进行瞬时表达，也可整合到靶细胞的染色体上从而产生不同基因型和表型的稳定克隆。该方法可广泛用于转染许多不同类型的细胞。 【仪器、材料和试 …

CRISPR的热度在分子生物界持续了数年，而2020年的诺贝尔化学奖授予给了两位CRISPR的奠基者，更是将CRISPR的研究热潮推上了顶峰。 CRISPR实际是（clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats，成簇的有规律的间隔短回文片段）的简称。 1987年，科学家在大肠杆菌中发现了一段“ …

沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的，而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。 一、步骤 于最多体积450 μl 的DNA 样品中，加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。 加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇，充分混匀。 样品踩于冷环境中沉淀：-20℃ 过夜，或－70℃30 min, 或干冰中5 min 。 使用干冰进行乙醇沉淀 …

1、原理 反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段，而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，再用一对反向的引物进行PCR，其扩增产物将含有两引物外未知序列，从而对未知序进行分析研究.  2、目 …

一、探针的标记 如下设置探针标记的反应体系： （1）待标记探针 (1.75 pmol/μl) ：2μl （2）T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) ：1μl （3）Nuclease-Free Water ：5μl （4）[γ-32P]ATP(3 000 Ci/mmol at 10 mCi/ml) ：1μl （5）T4 P …

推荐用6 ％丙烯酰胺、非梯度胶为起点。可使用两种胶：一种在相对短的时间获得较短的寡核苷酸信息；另一种是用较长时间以使较长的寡核苷酸得到最大限度的分离。这两种凝胶分离过程，采用6 ％丙烯酰胺，可以从一套测序反应中获得300~350 个碱基的序列信息。另一种可选的方案是使用两种不同浓度的胶，使较短片段和较长片段的寡核苷酸得到最大限度的分离。 材料 盛于喷射洗瓶的 …

1.完全基因组 在去年5月发表的预印本中，人类共有基因组序列 GRCh38 添加了近 2 亿个新碱基对，并撰写了人类基因组的最后一章。 GRCh38 于 2013 年首次发布，一直是一个有价值的工具，但也存在漏洞。主要是因为测序技术产生的读数准确但较短。它们的长度不足以明确地绘制出高度重复的基因组序列，包括覆盖染色体末端的端粒和在细胞分裂过程中协调新复制的 …