分子生物学

荧光表达后的细胞可以在冻存后72小时再测荧光，但有几点需要注意： 细胞存活率：冻存和解冻过程可能会影响细胞的存活率和状态。确保细胞在解冻后恢复良好，具有正常的形态和活力。 荧光稳定性：荧光蛋白的稳定性可能会随时间或细胞状态的变化而有所改变。确保荧光信号在解冻后仍然足够强且稳定。 冻存条件：使用适当的冻存保护剂（如DMSO）并在-80°C或液氮中冻存，以尽量减 …

使用可重复使用的玻璃移液管 可重复使用的移液管通常放置在金属桶中。要用于细胞或细菌实验，移液管必须用棉花塞住。 将小桶的盖子拧松（用左手的最后两个手指打开和夹住。） 左手拿住小桶，右手卸掉盖子。 用火烧一下盖子和小桶的开口处，把盖子放在小桶的旁边。 左手水平拿好小桶，轻轻摇动， 使一两根移液管的头部露出一点，方便抓取。 取出一根移液管，把小桶放好。拿出移液管 …

沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的，而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。 一、步骤 于最多体积450 μl 的DNA 样品中，加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。 加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇，充分混匀。 样品踩于冷环境中沉淀：-20℃ 过夜，或－70℃30 min, 或干冰中5 min 。 使用干冰进行乙醇沉淀 …

1. 剪下一段足够装得下要透析物质的透析袋，在每个末端留下大概2 英寸（总共留下4英寸）来捆绑透析袋。（可以买到特殊的管子来进行微量的透析。）2. 透析袋的两端都要打结，或者用透析夹封住末端。3. 用戴手套的手打开透析袋的一个末端，另一个手拿住透析袋，把样品认真地装入透析袋中。4. 扎住或者夹住透析袋的末端，夹住之前先挤压赶走气泡，检查渗漏，尤其注意末端。5 …

用仲丁醇（ 2 －丁醇）或正丁醇（ 1 － 丁醇）等溶剂萃取水溶液时，部分水分子会进入有机相，而核酸依然留在水相。重复抽提几次后可显著减少核酸溶液的体积。这一浓缩方法可用于减少稀溶液的体积，以使核酸易于通过乙醇沉淀得到回收。 试剂 DNA 样品     异丁醇 方法 计算核酸溶液体积，在2 5 °C 下加入等量的异丙醇。轻微、充分混匀两相。 加入过多的异丙醇 …

1.       样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2.       凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …

蛋白质结构预测（Protein Structure Prediction）是一项利用计算方法预测蛋白质分子的三维结构的技术。由于蛋白质的功能很大程度上依赖于其三维结构，预测其结构对理解生物过程、药物设计等领域具有重要意义。然而，实验确定蛋白质结构（如X射线晶体学、核磁共振等方法）耗时费力，因此计算预测成为重要替代方法。 蛋白质结构预测的主要方法 同源建模（H …

【试剂与器材】 （一）试剂 1． 0.1mol/L NaOH ，每组200mL 2． 寡聚Oligo（dT）-纤维素 3． 加样/洗涤缓冲液1：0.5 mol/L NaCl, 20 m mol/L Tris-HCl(pH 7.6)，每组250mL 或0.5mol/L NaCl, 20mmol/L Tris-HCl(pH7.6), 1mmol/L EDTA(p …

1． Bradford 工作液 95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250，溶解完后再加磷 85%磷酸 52ml 酸，最后超纯水定容至500ml。过滤后置于棕色瓶 考马斯亮兰G250 0.035g 外加油皮纸保存（Bradford不稳定，一周内有效） 2． 裂解液 尿素 8M 硫脲 2M CHAPS 4% DTT 60 mM Tris—base 4 …

本方案(Chomczynski1993) 可以从部分组织或细胞中同时提取RNA 、DNA 和蛋白质。像它的前身(Chomczynski and Sacchi 1987) 一样，此方法涉及用异硫氰酸胍和苯酚的单相溶液裂解细胞。加入氯仿产生第二（有机）相，从而DNA 和蛋白质被抽提，而RNA留在水相上清中。有机相中DNA 和蛋白质的分离，通过按顺序用乙醇、异丙醇 …