英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »细胞RNA转染实验的一些建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »siRNA转染（entranster）与成纤维细胞瘤细胞（l929-a）研究
L929成纤维细胞瘤细胞（l929-a）和L929纤维肉瘤细胞（l929-n）是不同的细胞系，常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α（TNFα）的研究，TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而，当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时，l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死，在l929-a中却不是。现分享一篇运用siRNA转染（entranster …
阅读更多 »细胞RNA转染注意事项
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »哪种RNA转染试剂效果更好？ Turbofect or EntransterTM-R4000？
近期，上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent（Thermo）和 EntransterTM-R4000（Engreen）进行了一次RNA转染比较。比较情况如下： 实验方法 转染试剂：Turbofect transfection reagent（Thermo）和 EntransterTM-R4 …
阅读更多 »影响RNA转染实验的因素有哪些？
1. 转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. 2. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与SASH1和黑色素细胞研究
在小鼠胚胎中，成黑素细胞起源于背神经脊，沿着表皮和真皮之间的背侧通路迁徙，在真皮中分散，最终进入表皮，并广泛扩散。现分享一篇RNA转染（Entranster）与SASH1和黑色素细胞研究的文献，以供参考。
阅读更多 »siRNA转染至细胞有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与CHL1与胶质瘤细胞研究
与L1CAM同源（接近同源的L1）的细胞粘附分子（CHL1）是细胞粘附分子L1（L1CAM）基因家族的一个成员。虽然其表达和功能已经在一些肿瘤的报道，在小鼠胶质瘤发生发展中的作用尚不清楚。现分享一篇RNA转染（Entranster）与CHL1与胶质瘤细胞研究的文献，以供参考。
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与三氯乙烯和肝癌发生研究
三氯乙烯（TCE）是一种挥发性有机化学试剂，已广泛应用于工业有机溶剂中，是大气、土壤、地下水和食品中的常见污染物。由于肝脏是主要的TCE靶器官之一，TCE引起的肝损伤在职业工作者中经常被报道，TCE暴露被怀疑与肝癌的风险增加有关。在动物实验中，TCE处理可诱导小鼠肝细胞癌（HCC），但其机制尚不清楚。现分享一篇RNA转染（Entranster）与三氯乙烯和肝 …
阅读更多 »