TAR DNA结合蛋白-43(TDP-43)是一种多功能的DNA和RNA结合蛋白,参与RNA转录、选择性剪接,并可调节细胞中mRNA的稳定性。TDP-43已被证明是患有肌萎缩侧索硬化症(ALS)和额颞叶变性(FTLD)患者中神经元和胶质细胞包涵体病理学培养基的关键组分。最近的报告表明,TDP-43蛋白是一种 …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与PPARα调节肿瘤细胞的增殖和衰老研究
肉碱棕榈酰转移酶(Carnitine palmitoyltransferase 1c,cpt1c),位于线粒体膜外,在脂肪酸的转运和氧化中起着关键的作用。它也参与细胞增殖,是癌细胞衰老的潜在驱动力。然而,其上游调控机制是未知的。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARαα)是一个配体激活转录因子,可调节脂质代谢和肿瘤进展。现分享一篇ECL发光液(enlight) …
阅读更多 »哪种RNA转染试剂效果更好? Turbofect or EntransterTM-R4000?
近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent(Thermo)和 EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下: 实验方法 转染试剂:Turbofect transfection reagent(Thermo)和 EntransterTM-R4 …
阅读更多 »自噬依赖的Axin2+癌干细胞生成促进肝硬化中的肝癌发生
标题:Autophagy-dependent generation of Axin2+ cancer stem-like cells promotes hepatocarcinogenesis in liver cirrhosis 影响因子:(Oncogene,2017年):7.385(2023年最新IF为8.0,JCR Q1区) 文献概要:自噬是肝硬化的一 …
阅读更多 »做好siRNA转染的要点
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …
阅读更多 »转导细胞的检测分析
1. 制备载体储备液。 2. 以每个靶细胞不同的MOI 或载体剂量转导靶细胞。 腺病毒载体: 100~ 10 000 个病毒颗粒/靶细胞。腺相关病毒载体: 10 000~ 100 000 个病毒基因组/靶细胞。慢病毒载体: MOI5 ~ 500 。 3 在转导后3 ~ 5 天对转入基因的表达进行评价。 对于载体编码蛋白质,有多种方法可用来评价转导细胞中转入基 …
阅读更多 »请问蛋白半衰期30小时,siRNA转染后大约多久收样合适呢?
既然目标蛋白的半衰期是30小时,说明它在细胞中相对稳定,也就是说,蛋白不会很快降解。 在使用siRNA干扰该蛋白的表达时,有几个关键时间点需要考虑: 一般siRNA作用流程: 转染后6–12小时:siRNA开始被细胞利用,mRNA水平开始下降。 24–48小时:mRNA水平通常显著降低(具体情况因靶基因和细胞类型而异)。 48–72小时:蛋白水平逐步下降,尤 …
阅读更多 »体内转染与microRNA-340-5p在肺动脉高压中的调控机制研究
肺动脉高压(PAH)是一种进行性、致命的疾病,其特征是肺动脉压和血管阻力持续增加,可能导致右心室衰竭,最终死亡。PAH的症状包括运动性呼吸困难、疲劳、胸痛和头晕。此外,当肺血管阻塞时,急性肺栓塞(APE)也可导致肺动脉高压。肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动脉平滑肌细胞(PASMCS)增殖导致晚期血管管腔阻塞。尽管近年来治疗取得了进展,但PAH仍 …
阅读更多 »RNA转染与LncRNA SNHG12对胃癌细胞BGC-823增殖影响的研究
胃癌是一种常见的上皮性癌,是世界范围内最常见的第五种恶性肿瘤。近年来胃癌的发病率一直呈上升趋势。每年约有一百万例胃癌发生,其中东亚地区占到50%,尤其是中国,严重危害人民健康和生命。中国胃癌的年发病率约为400000,占全世界病例总数的42%,并且总死亡率逐年上升。因此,寻找可靠的胃癌标志物和靶点是至关重要 …
阅读更多 »嘌呤霉素筛选标记的病毒滴定 Protocol
关于使用嘌呤霉素筛选标记的慢病毒或逆转录病毒进行病毒滴定的 protocol,整理了一个常用且较为权威适用于慢病毒系统: 【嘌呤霉素筛选法的病毒滴定 Protocol】 原理简述: 将病毒感染宿主细胞,使用嘌呤霉素筛选,仅有成功整合了抗性基因的细胞能存活。最后通过计数存活细胞(克隆或整体密度)来估算病毒滴度。 实验材料: 病毒上清; HEK293T 或其他易 …
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