可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …
阅读更多 »ECL发光液与淫羊藿苷对哮喘小鼠慢性气道炎症抑制作用研究
哮喘是一种常见的慢性呼吸道炎症性疾病其特点是喘息,气促、胸闷、咳嗽,以及呼气气流受限。研究认为哮喘是一种异质性疾病,具有不同的发病机制。淫羊藿甙是从淫羊藿中分离的一种黄酮苷,已报道具有抗骨质疏松、抗炎和抗抑郁的功能。现分享一篇ECL发光液(Enlight)与淫羊藿苷对哮喘小鼠慢性气道炎症的抑制作用研究的文献 …
阅读更多 »ECL发光液与上皮性卵巢癌差异表达蛋白的鉴定及验证研究
卵巢癌是女性死亡的第五大死因,也是最致命的妇科肿瘤。每年新增卵巢癌病例22280例,死亡率15500例,占女性新增癌症病例的3%和所有癌症死亡病例的6%。卵巢上皮性癌(EOC)由于盆腔脏器位置深,早期诊断困难,因此初诊时60%以上的患者处于晚期。EOC的标准治疗是手术,其次是铂类辅助化疗。虽然EOC的治疗 …
阅读更多 »RNA转染与小鼠LRP5基因杂合缺失及调控成骨细胞分化研究
骨骼系统稳态受免疫系统的动态影响。低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)是Wnt信号通路的共同受体,它调节人和小鼠的骨代谢。免疫紊乱可导致骨代谢异常。目前还不清楚LRP5是否以及如何改变免疫系统的平衡来调节骨稳态。 现分享一篇RNA转染(Entranster)与小鼠LRP5基因杂合缺失改变免疫细胞形态及调控成骨细胞分化研究的文献,以供参考。
阅读更多 »体内外RNA转染(Entranster)与sirtuin3和肾缺血再灌注损伤研究
缺血再灌注(I/R)可引起急性肾损伤,其特征是增加活性氧(ROS)和线粒体损伤,并破坏肾小管上皮细胞的细胞极性、细胞骨架完整性和细胞基质和细胞-细胞相互作用。线粒体蛋白sirtuin 3(SIRT3)可能有助于减轻或预防I/R损伤。SIRT3过表达有助于恢复急性肾损伤模型中线粒体的动态变化。但关于SIRT3是否能够及如何减轻I/R引起的急性肾 …
阅读更多 »RNA转染(entranster)与Stat3抑制可增强cdn诱导的sting信号和抗肿瘤免疫研究
环GMP-AMP合成酶(cgas)-干扰素基因刺激剂(sting)通路是先天免疫的关键调节因子,在肿瘤治疗中已成为一个有前途的药物靶点,但由于其在肿瘤发展和免疫中的二分法作用,使得该通路在肿瘤治疗中的应用变得更加复杂。白细胞介素-6/Stat3通路的反馈激活可减弱Sting通路的激活和诱导的抗肿瘤免疫。现分享一篇RNA转染(entranster)与Stat3 …
阅读更多 »细胞转染siRNA后,目标基因的表达反而升高的原因是什么?
siRNA转染后目标基因不降反升的现象可能由多种原因引起,常见的因素包括: siRNA设计不合理: siRNA的靶点选择不佳,未能有效靶向目标基因的mRNA,导致抑制效果差或反而激活了基因表达。可以尝试设计不同的siRNA靶点或使用更为优化的siRNA工具进行设计。 转染效率问题: 低转染效率可能导致siRNA无法进入足够多的细胞,从而未能有效抑制目标基因。 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与睾丸生殖细胞肿瘤研究
睾丸生殖细胞瘤(Testic..cell tumors,TGCTs)是青少年和青年男性最常见的实体瘤之一,约占2012年全世界20~39岁男性肿瘤的8.9%。肿瘤生长受癌细胞与肿瘤微环境的串扰调制。最近的进展表明,肿瘤细胞中的miRNA功能障碍可以调节肿瘤微环境以间接决定其进展。然而,这一过程在睾丸生殖细胞肿瘤(TGCTs)中知之甚少。现分享一篇RNA转染( …
阅读更多 »揭秘RNAi,缔造实验神话
用siRNA进行transient transfection不稳定,几代细胞以后,症状就会消失,所以在转染几天(1-3)后要立刻抽提蛋白,进行分析。 用质粒中的shRNA进行转染,如果质粒含有抗生素位点,可以进行筛选,获得较稳定的细胞株系,但需要时间较长 用病毒中的shRNA进行感染(infection),抗生素筛选后,可以获得很稳定细胞株系。 瞬时RNAi …
阅读更多 »做慢病毒感染实验前,你需要哪些知识储备?
慢病毒载体的构建: 慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成,即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白;载体成分则与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转 …
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