测序正确是一个重要的验证步骤,但它不能完全说明shRNA构建没有问题。下面我会具体说明为什么。 测序正确说明了什么? shRNA序列(包括发夹结构、目标序列)与设计一致: 如果你对构建后的质粒进行了Sanger测序,序列结果和你设计的shRNA完全一致,这说明你的克隆步骤(连接、转化等)是成功的。这意味着你至少在DNA水平上构建了正确的序列结构。 但这并不代 …
阅读更多 »ECL发光液与锌指因子ZNF121和上皮细胞增殖研究
MYC是一种强有力的癌基因蛋白,调节多种细胞过程,包括增殖、凋亡、分化、干细胞特性、衰老和迁移。MYC主要作为转录因子发挥作用,与大量蛋白质相互作用,MYC相互作用蛋白的鉴定和对于理解MYC功能是非常重要的。现分享一篇ECL发光液(enlight)与MYC相互作用蛋白-锌指因子ZNF121和上皮细胞增殖研究 …
阅读更多 »电转染后细胞孵育时间是多少?
每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染,最佳孵育时间一般为12-48小时,具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。 如需了解更多关于电转染试剂的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/efficient-electroporation
阅读更多 »通过转染双链siRNA 在果蝇S2 细胞中进行RNA 干扰
本方案介绍一种通过试剂向果蝇S2 细胞转运siRNA 以触发RNA 干扰的有效方法。本方案适用于24 孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿,需要根据培养孔的表面积换算细胞密度和试剂用量(表1 ) 。 表1 果蝇细胞转染所用细胞, 转染试剂和siRNA (或者ASO) 的体积 培养板或培养皿 24孔 12孔 6孔 6cm 10cm 每孔 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与骨桥蛋白对肝毒性代谢调节作用研究
骨桥蛋白(OPN)是一种众所周知的促炎症分子,在对乙酰氨基酚(APAP)引起的肝毒性中已被观察到。然而,OPN诱导的精确细胞来源及其在APAP诱导的肝毒性中的作用还尚不清楚。现分享一篇体内转染(Entranster)与骨桥蛋白对肝脏毒性代谢调节作用研究的文献,以供参考。
阅读更多 »怎样做好细胞电转染实验?
要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞 …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤,以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μ …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与烟曲霉N-聚糖加工,形态发生及毒性研究
Kexin样蛋白属于枯草杆菌蛋白酶家族。几种真菌的Kexin样蛋白已经被研究。缺乏KEXIN样蛋白的突变体表现出如细胞壁缺陷、异常极性等较强的表型,以白色念珠菌为例,其毒力会降低。然而,只有几种蛋白质被确认为Kexin样蛋白酶在这些真菌物种中的底物。Kexin样蛋白在这些真菌物种的形态发生中的作用尚不清楚。现 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与睾丸生殖细胞肿瘤研究
睾丸生殖细胞瘤(Testic..cell tumors,TGCTs)是青少年和青年男性最常见的实体瘤之一,约占2012年全世界20~39岁男性肿瘤的8.9%。肿瘤生长受癌细胞与肿瘤微环境的串扰调制。最近的进展表明,肿瘤细胞中的miRNA功能障碍可以调节肿瘤微环境以间接决定其进展。然而,这一过程在睾丸生殖细胞肿瘤(TGCTs)中知之甚少。现分享一篇RNA转染( …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与小胶质细胞M2极化和脑炎性保护作用研究
小胶质细胞介导的炎症会导致脑出血(ICH)继发性损伤。活化的小胶质细胞在脑损伤和修复中具有促炎症(M1)和抗炎(M2)的双重功能。miR-124是一种有效的在脑损伤后抗小胶质细胞的抗炎药。然而,ICH后小胶质细胞的M1/M2极化的调节作用还未见报道。现分享一篇体内转染(Entranster)与小胶质细胞M2极化和脑炎性保护作用研究的文献,以供参考。
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