英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
需要，可用一个孔检测一下，因为有培养基中可能含有氧化还原反应的物质，在正式实验之前有必要先确认培养基和CCK8 是否反应。一般正常在的OD 值应该在0.4 以下。 如需了解更多关于cck8产品的信息，请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »细胞siRNA转染有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。
阅读更多 »ECL发光液与Polo样激酶1对端粒酶活性影响的研究
端粒的维持受端粒酶活性的调控，包括端粒酶全酶及其相关蛋白。端粒酶的活性在细胞中被精确控制，其失调是癌症的特征之一。端粒酶催化亚单位端粒酶逆转录酶（hTERT）在端粒酶活性中起重要作用。 现分享一篇ECL发光液（enlight）与Polo样激酶1（PLK1）通过影响端粒酶逆转录酶的稳定性上调端粒酶活性研究的文献，以供参考。 文献地址：http:// …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与香烟烟雾提取物接触后平滑肌细胞的增殖研究
动脉粥样硬化是发病率和死亡率的主要原因。动脉粥样硬化的特点是血管平滑肌细胞（SMCs）过度增殖，是多种因素联合作用的结果。流行病学调查表明，吸烟与动脉粥样硬化密切相关，在血管平滑肌细胞（SMC）的过度增殖起着关键性作用。现分享一篇ECL发光液（enlight）与香烟烟雾提取物接触后平滑肌细胞的增殖研究的文献，以供参考。
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与siRT3过表达抑制肾肿瘤细胞生长研究
SIRT3是NAD+依赖性的线粒体蛋白脱乙酰酶，参与调节中枢代谢和线粒体蛋白稳定。SIRT3在肾透明细胞癌（CCRCC）中被下调，这是肾癌的最常见形式。尽管ccRCC具有典型的Warburg样表型、线粒体功能障碍和脂肪沉积增高的特征，但SIRT3是否参与肿瘤的发生和发展尚不清楚。现分享一篇ECL发光液（enlight）与siRT3过表达抑制肾肿瘤细胞生长研究 …
阅读更多 »siRNA转染（Entranster）与成纤维细胞瘤细胞研究
L929成纤维细胞瘤细胞（l929-a）和L929纤维肉瘤细胞（l929-n）是不同的细胞系，常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α（TNFα）的研究，TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而，当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时，l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死，在l929-a中却不是 …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想的原因是什么？
siRNA转染效率不理想，常见的原因有：1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总 …
阅读更多 »lonza电转,同时电转DNA和RNA，其中RNA的转染效率降低很多，单独RNA，效率很高；共转的时候，RNA的总量是一样的，一个GFP的mRNA，所以可以通过荧光判断表达量，但是当加入DNA后，GFP的荧光就非常差了，用的程序是适用于mRNA的一个程序，有什么建议吗
单独电转mRNA（GFP）信号很好，但一旦同时把DNA一起电转，GFP荧光显著下降。这个往往不是“挤占表达资源”这么简单，更多是由“电转参数 + 细胞先天免疫反应 + 总核酸/盐负载”三方面共同导致。给你一个可操作、优先级排序的排障与优化清单（不需要额外设备就能尝试）： 先做两件最快见效的事 把DNA量往下砍 10–100×（起始试 10 ng～100 ng …
阅读更多 »细胞电转染实验效率不理想的原因
1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期 …
阅读更多 »为什么选择AAV作为基因治疗的病毒载体？
AAV，即腺相关病毒载体，属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后，可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点，但AAV不会引起人类疾病。实际上，我们市面常见的AAV并不是野生型AAV，而是重组AAV（rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构（图片来源：Semantic Scholar） 目前来看，rAAV相比较其他病毒载体，未发现 …
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