1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表),充分混匀,制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表),充分混匀,制成病毒稀释液。 注:由于病毒浓度情况不同,具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
阅读更多 »为什么选择AAV作为基因治疗的病毒载体?
AAV,即腺相关病毒载体,属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后,可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点,但AAV不会引起人类疾病。实际上,我们市面常见的AAV并不是野生型AAV,而是重组AAV(rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构(图片来源:Semantic Scholar) 目前来看,rAAV相比较其他病毒载体,未发现 …
阅读更多 »测定病毒滴度时,是使用 HEK293 细胞,还是用目的细胞?
测定病毒滴度时,是否可以直接使用 HEK293 细胞,取决于你使用的病毒类型和实验目的。一般来说: 如果是腺病毒或慢病毒,HEK293 细胞(特别是 HEK293T 细胞)通常是不错的选择,因为它们表达病毒包装过程中需要的辅助因子(如腺病毒的 E1A/E1B 或慢病毒的 VSV-G),可以有效地被感染并产生明显的病毒效应。因此,很多实验室会用 293 细胞测 …
阅读更多 »同样是慢病毒感染,为什么你的感染效率那么低?
在慢病毒感染细胞过程中,会遇到哪些问题呢? 1.在细胞感染时, MOI是一个非常重要的指标,如何确定MOI值呢? MOI:复感染指数,是指病毒对细胞的感染能力,MOI越高,细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。 MOI=(病毒滴度×病毒体积)/细胞数目 感染条件及MOI的选择原则: 1. 在细胞形 …
阅读更多 »慢病毒感染后,细胞不生长怎么办
慢病毒感染后,细胞不生长可能有多种原因。以下是一些常见的原因和解决方法: 病毒滴度过高: 原因:高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性,使细胞无法正常生长。 解决方法:降低病毒的滴度,进行一系列稀释实验,找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 细胞状态不佳: 原因:感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法:确保细胞在最佳状态下进行感染,例如在感染前 …
阅读更多 »靶向eIF4G1根除胰腺癌研究
文献标题 Reprograming immunosuppressive microenvironment by eIF4G1 targeting to eradicate pancreatic ductal adenocarcinoma 期刊与影响因子 期刊: Cell Reports Medicine 影响因子:14.3(2024年) 英格恩(Engree …
阅读更多 »如何使动物体内病毒感染效率提高20-50倍
由于动物体内环境的复杂性,我们在选择动物体内病毒感染试剂时,会区别于细胞实验。通常为避免动物产生过激的免疫反应或者死亡,这类病毒感染试剂纯度会更高些,并且适配体液环境。因此,争对动物体内病毒感染实验,则需要适配特定的动物体内病毒感染增强试剂。 发表在《aging》上的一篇题为“Ubenimex induces autophagy inhibition and …
阅读更多 »自噬依赖的Axin2+癌干细胞生成促进肝硬化中的肝癌发生
标题:Autophagy-dependent generation of Axin2+ cancer stem-like cells promotes hepatocarcinogenesis in liver cirrhosis 影响因子:(Oncogene,2017年):7.385(2023年最新IF为8.0,JCR Q1区) 文献概要:自噬是肝硬化的一 …
阅读更多 »慢病毒感染后,未能实现相关敲降的原因是什么?
慢病毒感染后未能实现敲降的原因可能有多种。以下是一些可能的原因及其解释: 慢病毒包装质量问题: 病毒滴度较低,导致感染效率不高,可能无法有效转导目标细胞。 病毒颗粒中没有足够的有效载体,影响敲降效果。 靶向序列设计问题: shRNA或sgRNA设计不合理,没有有效靶向目标基因的序列。 目标序列与基因组其他部位的相似性导致脱靶效应,影响敲降效果。 感染条件不佳 …
阅读更多 »有了它,就能不断发射争对各种病毒的疫苗
2021年2月25日,陈薇团队研发的重组新冠病毒疫苗(腺病毒载体)获批上市。她说:“这个平台好比火箭发射平台,有了它,就能不断「发射」争对各种病毒的疫苗。” 过去的几十年间,复制缺陷的人类重组腺病毒V5(HadV5)已经成为一种广泛应用在真核基因表达分析、疫苗研究等领域的模式系统。这种经修饰后的腺病毒,其E1和E3基因已被移除,依然具备细胞感染的能力,但产生 …
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英格恩生物技术博客 生物实验干货分享