英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
在慢病毒滴度测定的倍比稀释实验中，设置复孔主要有以下几个作用： 提高实验数据的可靠性由于生物实验存在一定的随机误差，复孔可以减少实验数据的偶然性，提高测量的准确性和重复性。 计算平均值，减少误差即使计算滴度时可能未直接用到每个复孔的数据，而是取某个稀释度下的阳性孔（如GFP阳性细胞数或抗生素筛选存活细胞数），但通常会计算复孔的平均值，以降低误差。 观察实验一 …
阅读更多 »使用带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常用什么方法？
如果您使用的是带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常情况下可以通过流式细胞仪来实现，步骤如下： 收集细胞：首先收集感染后的细胞，并用适当的缓冲液进行重悬。 去除死细胞：可以通过加PI（碘化丙啶）或7-AAD等染料来排除死细胞，这样有助于提高检测的准确性。 流式检测：使用流式细胞仪时，选择FITC通道（通常是FL1通道），因为GFP的荧 …
阅读更多 »如何利用好慢病毒感染的原理和特点？
一、原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非 …
阅读更多 »病毒载体的基本元件
反转录病毒载体 最常用的反转录病毒载体基于Mo -MLV 。第一代载体所携带的转基因的两侧是2 个完整的LTR, 由增强子(U3) 、R 区（即转录起始区，在病毒颗粒中的载体基因组两端均存在）及U5 区构成。病毒载体的包装主要由包装信号序列（ψ）介导，而邻近的gag序列能够显著提高其包装效率。所有反转录病毒载体均携带一个ψ甲序列和部分gag 序列组成的扩展包 …
阅读更多 »同样是慢病毒感染，为什么你的感染效率那么低？
在慢病毒感染细胞过程中，会遇到哪些问题呢？ 1.在细胞感染时， MOI是一个非常重要的指标，如何确定MOI值呢？ MOI:复感染指数，是指病毒对细胞的感染能力，MOI越高，细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。 MOI=（病毒滴度×病毒体积）/细胞数目 感染条件及MOI的选择原则： 1. 在细胞形 …
阅读更多 »自噬依赖的Axin2+癌干细胞生成促进肝硬化中的肝癌发生
标题：Autophagy-dependent generation of Axin2+ cancer stem-like cells promotes hepatocarcinogenesis in liver cirrhosis 影响因子：（Oncogene，2017年）：7.385（2023年最新IF为8.0，JCR Q1区） 文献概要：自噬是肝硬化的一 …
阅读更多 »Cell Death Discovery | 南京大学口腔医学院：牙周膜成纤维细胞铁下垂机制新发现
《Cell Death Discovery》期刊上发表的题为“Periodontitis-level butyrate-induced ferroptosis in periodontal ligament fibroblasts by activation of ferritinophagy“的文章表明牙周炎水平的丁酸盐通过激活 NCOA4 …
阅读更多 »慢病毒载体
慢病毒属于反转录病毒科，与该科其他病毒一样，病毒粒子携带ssRNA, 必须反转录并整合至宿主细胞基因组（原病毒）产生有效感染。慢病毒的显著特点是其基因组复杂、圆柱形或圆锥形的核衣壳携带病毒基因组。核衣壳被携带包膜糖蛋白的双层膜包裹，包膜糖蛋白负责与细胞表面受体进行相互作用及进入宿主细胞。反转录病毒是几乎所有脊椎动物的主要病原体。人类免疫缺陷病毒l 型（HIV …
阅读更多 »如何选择慢病毒和腺病毒系统？
慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统（Lentivirus） 腺病毒表达系统（Adenovirus） 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞，适用于难转染的原 …
阅读更多 »如何使动物体内病毒感染效率提高20-50倍
由于动物体内环境的复杂性，我们在选择动物体内病毒感染试剂时，会区别于细胞实验。通常为避免动物产生过激的免疫反应或者死亡，这类病毒感染试剂纯度会更高些，并且适配体液环境。因此，争对动物体内病毒感染实验，则需要适配特定的动物体内病毒感染增强试剂。 发表在《aging》上的一篇题为“Ubenimex induces autophagy inhibition and …
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