选择适合哺乳动物细胞的高效表达载体时,通常需要考虑以下几个关键因素: 1. 目标蛋白的特性 蛋白大小和复杂性:如果你的目标蛋白比较大或具有复杂的后期修饰(如糖基化、磷酸化等),你需要确保载体能支持这些修饰。哺乳动物细胞通常用于表达这种需要后修饰的蛋白。 表达水平:有些载体可以提高蛋白表达的水平。你可以根据实验需要选择一个具有高表达效率的载体。 2. 选择合适 …
阅读更多 »如何做好细胞电转染实验?
要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内 …
阅读更多 »视神经星状胶质细胞的培养
随着细胞培养技术的不断改进,虽然正常细胞难于培养成活,科研人员还是不断研究各种正常细胞的培养方法。到目前为止,几乎体内各种组织细胞均可在体外成功培养。越来越多的研究工作可应用体外培养的正常细胞作为模型开展工作。神经胶质细胞的成功培养最早由Raff 等完成。视神经胶质细胞的培养开始于1990 年,先后有多个实验室培养成功。视神经胶质细胞参与眼部多种疾病的发生、 …
阅读更多 »RNA转染过程中常见问题及解决方案
RNA转染试剂Entranster-R4000使用过程中常见问题及解决方案如下:
阅读更多 »如何优化细胞RNA转染实验条件?
可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …
阅读更多 »AAV病毒-细胞外RNAs-TLR3信号通路认知障碍研究 (IF:39.3)
文献标题:Extracellular RNAs-TLR3 signaling contributes to cognitive impairment after chronic neuropathic pain in mice 影响因子:Signal Transduction and Targeted Therapy 是Nature旗下期刊,2023年影响因 …
阅读更多 »调控红细胞脱核机制研究
标题 The accumulation of miR-125b-5p is indispensable for efficient erythroblast enucleation 影响因子 该论文发表在《Cell Death and Disease》期刊上,2022年的影响因子为9.0,属于细胞生物学和医学领域的权威期刊。 文献概要 该研究探讨了miR-1 …
阅读更多 »Hela细胞的电转染条件是什么?
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是: 对于0.2 cm电转杯,细胞密度为3×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为130V, 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯,细胞密度为3×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250μ …
阅读更多 »转染用的质粒,你提对了吗?
老板天天催着要实验进展,是不是很郁闷?可是细胞不给力,是不是很忧郁?刚刚复苏的细胞长的挺好的,可是转染后,细胞状态莫名其妙就变差了,是不是很伤心?转染试剂毒性大,换转染试剂?结果还是一样,是不是很无奈?勉强收了一点点细胞,可是还不够做个western blot的,是不是很抓狂?实验总是不能顺利进行,找不到原因,是不是都要吐血了?没人给指点迷津,是不是心都要碎 …
阅读更多 »基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物
文献标题 Highly efficient prime editors for mammalian genome editing based on porcine retrovirus reverse transcriptase (基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物) 影响因子 14.9(Trends in Biotechnology,20 …
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英格恩生物技术博客 生物实验干货分享