可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …
阅读更多 »western-blot实验的影响因素有哪些?
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝 …
阅读更多 »siRNA转染进细胞有哪些方法?
siRNA导入细胞有以下几种方法:化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素:细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术(Entranster)是最为常用的方法,而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
阅读更多 »western-blot化学发光时,出现非特异条带,该怎么办?
出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面: 1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2. 一抗是多克隆抗体,或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体,或降低抗体浓度,缩短抗体孵育时间,优化一抗和二抗的使用浓度。 3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量,延长洗膜时间,或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20。 4. …
阅读更多 »动物体内转染实验,如何评估不同组织的干扰效率?
运用体内试剂Entranster-in vivo进行体内转染实验后,针对具体的组织器官,不同的注射方法会明显影响效果。比如,大脑神经细胞的体内转染,可以采用尾静脉注射和侧脑室注射,用侧脑室的方法就好得多。再比如,肺部的体内转染,用气管灌注就比用尾静脉注射的方法好得多。体内转染试剂和核酸的混合物与靶器官的接触越直接越充分,效果越好。干扰效率 …
阅读更多 »动物体内转染实验,局部注射,应如何取样观察结果?
运用动物体内转染试剂Entranster-in vivo进行动物体内转染实验时,由于局部注射容易造成药液分布不均,在注射的近端,药液浓度高,效果明细;远端,药液浓度低,效果低一些。所以,一方面,需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织,另一方面,后续实验取样时,在保证实验的情况下,尽量取注射区域附近的组织,不取或者少取药液覆盖差的组织,以增加实验效果。
阅读更多 »相较于MTT法,CCK8试剂盒的优点有哪些?
英格恩生物的CCK8试剂盒具有以下优点: 1.使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂; 2.CCK-8法能快速检测; 3.CCK-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度; 4.CCK-8法的重复性优于MTT 法; 5.CCK-8法对细胞毒性小; 6.CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。 7. 性价比高,比同行的 …
阅读更多 »病毒感染增强剂Envirus使用时出现细胞毒性怎么办?
出现细胞毒性的原因有: 1.增强剂用量过大。建议适当减少增强剂用量。 2.病毒量过大。适当减少病毒用量。 3.适当减少病毒用量。增加培养基量或更换培养基。
阅读更多 »ECL发光液使用过程中注意事项
1. 发光液不宜暴露于强光下时间过久,请避光保存,在暗室操作。 2. 为了得到最佳的曝光效果,优化一抗、二抗的稀释比例。 3. 请选择高质量保鲜膜。 4. 对于Enlight发光液,应避免使用NaN3 回收HRP 偶联的抗体,因为NaN3 能抑制HRP 的活性。
阅读更多 »RNA转染过程中细胞毒性大怎么办?
RNA转染时细胞毒性大可能的原因有: 1.RNA与转染试剂比例不佳。建议进行预实验优化。 2.细胞密度不佳。调整细胞密度。 3.细胞污染。建议彻底清洁所有细胞培养相关用品。 4.转染试剂毒性较大。建议选择毒性较小的非脂质体转染试剂,如纳米材料的Entranster试剂等。
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