水溶性染料 alamarBlue 已用于体外定量多种类型细胞的活力( Fields and Lancaster 1993; Ahmed et al. 1994 ) 。该试剂极其稳定且无毒，因此可用于长时间连续监测细胞( Ahmed et al. 1994 ) 。基于上述原因， alamarBlue法被认为优于MTT 检测等经典的细胞活力检测方法。在一个比较实 …

试剂 运载 DNA l0mg/mL 细胞生长培养基 电穿孔缓冲液 指数生长的培养细胞 线性化或环状质粒DNA ( 1 ~ 5μg/μL , 溶于无菌去离子水） 磷酸盐缓冲液( PBS ) 胰岛素 设备 电穿孔杯 电穿孔仪器 血细胞计数器 组织培养皿或多孔培养板 组织培养瓶（75cm2） 方法 准备电穿孔用细胞。 对于贴壁细胞 电穿孔前一天，通过胰酶消化释放贴 …

电穿孔效率受以下几种因素的影响： 外加电场的强度。电压过低，培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过； 电压过高，细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系， 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔， 20% ～ 50％的细胞能够存活（根据台盼蓝拒染法的检测结果） ( Patterson 1979; Baum et al. …

与之前文章中介绍的DEAE－葡聚糖方法相反，此替方案采用较低浓度的DEAE－葡聚糖( 250μg/mL) ，与细胞作用的时间较长（达8h) 。尽管不如使用高浓度DEAE－葡聚糖的转染效率高，但低水平的DEAE－葡聚糖细胞毒性小。 试剂 DMEM 培养基 HEPES 缓冲的DMEM 培养基 方法 转染前24h, 通过胰酶消化收集指数生长的细胞，按105 个细胞 …

DEAE －葡聚糖介导的转染与磷酸钙共沉淀介导的转染在三个方面有重要的不同。第一，该方法用于克隆基因的瞬时表达，而不是细胞的稳定转化(Gluzman 1981 ) 。第二，该方法对BSC-1 、CV- 1 和COS 等细胞系非常有效，但对许多其他类型的细胞转染效果不理想。第三， DEAE－葡聚糖转染的DNA 用量比磷酸钙共沉淀转染少。采用0.1 ~ 1.0μ …

所有的转染实验均应包括对照，以检验各个试剂和制备的质粒DNA , 以及检测将要引入的基因或构建体的毒性。 瞬时表达的对照 阴性对照 在瞬时转染实验中，需要用载体DNA 和/或用于稀释待测质粒或基因的缓冲液转染一两个培养皿的细胞。通常采用鲑鱼精DNA 或用于构建重组体的空载体等其他惰性载体代替待测基因转染贴壁细胞。转染后，培养的细胞不应从培养皿上脱落，外观上也 …

方法 表达 细胞毒性 细胞类型 注释 优势 劣势 瞬时 稳定 脂质体介导方案1 可 可 可变 贴壁细胞，原代细胞系，悬浮培养体系 阳离子脂质与带负电荷的DNA 结合， 有的形成人工膜囊泡（脂质体）。产生的稳定阳离子复合物吸附并融合于带负电荷的细胞膜( Feigner et al. 1987, 1994 ) 免疫原性和细胞毒性低；可使用大质粒， 安全风险低，操 …

转染方法：将基因导入真核细胞的方法可分为三类：生化方法转染、物理方法转染、病毒介导的转导。 转染方法的选择取决于下列几个实验要素： ．最终目的是基因表达还是蛋白质生产 ．采用的细胞类型（贴壁细胞或悬浮细胞，适应培养的细胞或原代细胞） ．细胞系抵抗转染压力的能力 ．采用的筛选方法的类型 ．培养条件 ．转染的核酸种类( DNA 、RNA 、siRNA 或寡核菩酸 …

采用RNA体内转染试剂EntransterTM– in vivo发表的文献，研究方向包括大脑、神经、脊髓、眼睛、鼻、口腔、心脏、支气管、肺部、胃、胰、肝脏、肠、骨、肌肉、肾脏、膀胱、乳腺、生殖系统、胸膜、免疫系统、皮肤等各个方面。欢迎大家阅览与交流。 序号 研究方向 实验材料 文章题目 期刊 大脑 点击此处，打包下载所有大脑相关文献，提取码：btv9 1 大 …

采用DNA体内转染试剂EntransterTM– in vivo发表的文献，研究方向包括大脑、支气管、肺部、肝脏、胰腺、肠、骨、肌肉、免疫系统等方面。欢迎大家阅览与交流。 序号 研究方向 实验材料 文章题目 期刊 大脑 点击此处，打包下载所有大脑相关文献，提取码：v6at 1 脑损伤 DNA Rbfox-1 contributes to CaMK …