2022年 8月 20日, 星期六
新闻

单层细胞的培养

材料

  • 装在冷冻培养瓶中的细胞: BS-C-1  、CV-1  、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞
  • 70% (VIV) 乙醇
  • 起始和维持培养基(表1) , 37°C
  • PBS (可选)
  • 胰蛋白酶/EDTA: 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶/0. 02% (m/V) EDTA, 37℃
  • 25 cm2和150 cm2组织培养瓶
  • 湿润的、37°C 、5% CO2培养箱

表1 用于细胞系生长和维持的培养基a

细胞系 维持培养基 起始培养基
BHK-21 完全MEM-10 完全MEM-20
BS-C-1 完全MEM-10 完全MEM-20
CEF 完全MEM-10 完全MEM-10
CV-I 完全的DMEM-10 完全的DMEM-20
HelaS3 转瓶完全培养基-5 完全MEM-10
HuTK- 143B 完全MEM-10/BrdU 完全MEM-20/BrdU
  1. 在37°C 水浴中融化一支冷冻细胞的培养瓶,用70%乙醇将瓶口消毒,用移液管将细胞移入一个25 cm2 的组织培养瓶(装有5 ml 起始培养基)中,转动培养瓶,使细胞均匀地分布,放入湿润的5% CO2培养箱中37°C 培养过夜。
  2. 吸出起始培养基,换成维持培养基,将细胞放回培养箱内,每天检查细胞的汇合度。
  3. 当细胞长成汇合的单层时,吸出培养基,用PBS 或胰蛋白酶/EDTA 洗涤一次细胞,以除去残留的血清.
  4. 用足量的37℃胰蛋白酶/EDTA 刚好覆盖细胞单层(如一个25 cm2 的组织培养瓶用 0.3 ml) ,静置30~40 s, 摇动培养瓶,使细胞完全分开。
  5. 加入1. 4 ml 维持培养基,用吸管来回吹打细胞悬液几次,以分散细胞团块(这些细胞可用于传代)。
  6. 取0.5 ml 细胞悬液,将其加到一个新的150 cm2 组织培养瓶(含有30 ml 维持培养基)中,转动培养瓶,使细胞均匀地分布,放入37℃ 的CO2 培养箱中,直到细胞汇合(约1 周),大约每间隔一周按约1: 20 的比例分到维持培养基中来维持细胞。

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