英格恩技术博客 专注转染等实验

导致western Blot发光(ECL)“背景高”的原因有哪些?

Western Blot发光经常有“背景太高”问题,导致“背景高”的原因有很多,主要有以下几个方面:

1. 抗体浓度过高,洗涤不充分,可以造成抗体在膜上的非特异结合,导致高背景。可通过降低抗体稀释度,增加洗膜次数和Buffer用量,或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20加以改善。

2. 封闭不充分,会造成抗体在膜上的非特异结合,导致高背景。可通过4℃封闭过夜或增加封闭液中的蛋白浓度加以改善。

3. 使用了不恰当的封闭剂,可尝试不同的封闭剂。

4. 曝光过度,可减少底物显色时间,缩短曝光时间。

5. 操作过程中膜干了。确保膜完全浸没于buffer中,始终杜绝膜干。

6.发光液质量问题。可选用优质的发光试剂,比如英格恩生物的Enlight等。

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