英格恩技术博客 专注转染等实验

PCR实验扩增产物出现杂带是什么原因?

可能的原因和对应的解决方案如下:

1.引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。

2.循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。

3.酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。

4.退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 ℃为梯度设计梯度 PCR 反应优化退火温度。

5.样品处理不当。

6.Mg2+ 浓度偏高,因适当调整 Mg2+ 使用浓度。

7.若为 PCR试剂盒,也可能时试剂盒本身质量有问题。推荐使用engreen的PCR试剂盒,添加改良的DNA聚合酶,大大提高扩增产物的特异性和保真性。

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