英格恩技术博客 专注转染等实验

哪些因素会造成western-blot发光时发生荧光淬灭?

      荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象,即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光,但亮光很快就消逝了,压完片后条带却很弱,甚至没有条带,发生这种情况的原因可能有以下几个方面:

1. 抗体浓度太高,局部过多的HRP会快速消耗底物,导致荧光信号过强,条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。

2. 抗体浓度太低,荧光信号太弱,可能第一次压片能够获得很弱的条带,再压片就没有什么条带都没有。

3. 操作时间过长,膜逐渐干掉。避免膜干掉。

4. 不良的实验习惯导致设备或试剂污染。例如铁锈和不慎沾染的显影液、定影液,会造成荧光淬灭,甚至直接导致无荧光;

5.ECL发光液的质量。除过氧化物因接触空气被逐渐还原外,ECL发光液的成分通常都不稳定。建议选择发光稳定的试剂,如Enlight。

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