英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
- 首先确定模板RNA完整性好，无DNA污染。
- RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。
- 为了防止模板降解，在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。
- 使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。
- 若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。
- 设计引物时，避免在引物3’端含有互补序列，避免形成内部发卡结构。
- 可使用engreen的qPCR试剂，选用化学修饰的热启动酶，扩增效率和灵敏度更高。
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