英格恩技术博客 专注转染等实验

如何提高qPCR反应的灵敏度与特异性?

  1. 首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。
  2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。
  3. 为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。
  4. 使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。
  5. 若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。
  6. 设计引物时,避免在引物3’端含有互补序列,避免形成内部发卡结构。
  7. 可使用engreen的qPCR试剂,选用化学修饰的热启动酶,扩增效率和灵敏度更高。

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