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体内转染试剂对大脑转染的应用及比较

2015年6月份,苏州大学附属第一人民医院神经科学及脑神经研究所在《Critical Care Medicine》杂志发表了一篇影响因子为6.312的SCI文章《Cyclophilin A/Cluster of Differentiation 147 Interactions Participate in Early Brain Injury After Subarachnoid Hemorrhage in Rats》。该研究采用视交叉前池单注入构建实验性蛛网膜下腔出血SD大鼠模型。通过免疫荧光染色、Western blot、免疫共沉淀等检测到亲环素A和CD147的表达增加,亲环素A和CD147的相互作用也增加。同时,研究采用动物体内转染试剂EntransterTM-in vivo,将Cyclophilin A siRNA转染至蛛网膜下腔出血动物模型体内,使下调亲环素A的表达。再用重组人亲环素A和CD147的单克隆抗体研究亲环素A/ CD147在蛛网膜下腔出血致脑损伤早期的作用。

随着分子生物学的飞速发展,基因功能和基因治疗研究越来越收到人们的重视。人们尝试各种体内外方法探知相关基因及其生物特性。体外实验相对容易操作,体内相关研究目前主要有:动物体内转染和基因敲除动物。

基因敲除动物是通过DNA同源重组或基因的插入突变和iRNA原理制备,或通过诱导剂诱导获得。基因敲除动物可以实现基因的完全敲除,条件性基因敲除,基因定点插入,点突变研究,人源化研究。但是,基因敲除动物的制作周期很长,一般要10~20个月。而且动物饲养条件要求非常严苛,通常制作出的一个基因动物的单价是很高的,普通的实验室经费有限,使用受限制。而且基因敲除动物在制作过程中存在个体差异,对实验也会造成一定的影响。实验重复则要花费更多的时间和经费。

动物体内转染对大部分研究人员还是相对比较困难。以往的动物体内转染大部分采用病毒为载体,通过腺病毒或慢病毒的方法进行,往往花费的时间和周期长,实验也很难达到预期的效果。采用病毒进行体内转染,首先要构建相应的病毒载体,然后在细胞中进行病毒包装。通常情况下包装一次病毒至少几个月,花费几万到十几万。病毒感染的实际应用过程中,由于包装过程复杂,任何一个环节出错,都有可能导致包装失败或包装出来的病毒效率低下。病毒转染时间周期长,花费多,转染效率低,所以更需要一种简便快捷的体内转染方法出现,来解决病毒转染常出现的问题。

英格恩生物公司新推出了一种动物体内转染试剂EntransterTM-in vivo。EntransterTM-in vivo采用纳米技术合成,有效保护和浓缩核酸,避免核酸被体液破坏,并通过物理作用将核酸富集在细胞表面,增强核酸进入细胞组织,从而产生作用。动物体内转染试剂EntransterTM-in vivo可将小片断RNA如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor或DNA转染到动物体内,无需包装病毒,直接将DNA或RNA转染到动物体内,在动物体内进行RNA干扰或蛋白表达实验。EntransterTM-in vivo动物体内转染方便快捷,转染效率高,效果稳定可靠,适用于各种核酸和动物转染。它克服了病毒转染周期长,效率低,效果不稳定等问题,是目前动物体内转染最快捷有效的方法。

 

  基因敲除动物 病毒体内转染 EntransterTM-in vivo
技术方法 同源重组等方法获得基因敲除小鼠,然后进行实验 构建相应的病毒载体,病毒包装,然后进行注射 直接将核酸与转染试剂混合,注射动物体内
单次实验周期 10~20个月 几个月 3天
稳定性 一般
花费 几万到十几万 几万到十几万 几千到几万
基因敲除或整合几率 一般
物种限制 小鼠居多 各种动物 各种动物
筛选 需要排除马赛克现象对后续升值遗传的影响,并排除脱靶效应 无需特殊实验,可直接进行后续实验 无需特殊实验,可直接进行后续实验
操作步骤 复杂 复杂繁琐 简单
基因类型 各种 各种DNA/RNA 各种DNA/RNA
应用范围 基因功能及治疗研究 基因功能及治疗研究 基因功能及治疗研究

 

英格恩生物公司的动物体内转染试剂EntransterTM-in vivo转染效率高,操作方法简单,价格优惠,这对所有需要该方面实验研究的研究人员和科研单位无疑是个好消息。英格恩生物公司的这一研究推广必将推动更符合真实自然的疾病和生命秘密的进一步研究。

 

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