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DEAE －葡聚糖介导的转染与磷酸钙共沉淀介导的转染在三个方面有重要的不同。第一，该方法用于克隆基因的瞬时表达，而不是细胞的稳定转化(Gluzman 1981 ) 。第二，该方法对BSC-1 、CV- 1 和COS 等细胞系非常有效，但对许多其他类型的细胞转染效果不理想。第三， DEAE－葡聚糖转染的DNA 用量比磷酸钙共沉淀转染少。采用0.1 ~ 1.0μ …

反转录病毒载体 最常用的反转录病毒载体基于Mo -MLV 。第一代载体所携带的转基因的两侧是2 个完整的LTR, 由增强子(U3) 、R 区（即转录起始区，在病毒颗粒中的载体基因组两端均存在）及U5 区构成。病毒载体的包装主要由包装信号序列（ψ）介导，而邻近的gag序列能够显著提高其包装效率。所有反转录病毒载体均携带一个ψ甲序列和部分gag 序列组成的扩展包 …

分离后， DNA 经常被用于导入细胞和微生物，用来观察受体菌表型的改变或收获大批的供体DNA 及其翻译产物。 原核细胞 转化是细菌与分离的DNA 重组后发生遗传基因的改变。转化通常用来扩增克隆的DNA, 另一个常见的用途是获得大量特定的蛋白质——转化了表达载体的细菌将产生大量的DNA 编码的蛋白质。细菌转化主要有两种方法。 与高浓度的钙离子温育，导致细菌的脂 …

EntransterTM-in vivo体内转染试剂通过纳米技术合成，通过物理作用与核酸结合，浓缩包裹核酸，从而保护核酸免受免疫系统破坏，同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分，由于处于纳米尺度，粒径小，不易引起免疫反应，不影响动物和器官组织的功能，可以多次在同一动物注射。 一般情况下，核酸(μg)和EntransterTM-in vivo (μ …

1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 RNA浓度和转染试剂量的优化(24well) 1 2 3 4 RNA工作浓度 25nM 50nM 100nM 150nM 每孔RNA的量(pmol) 0.17μg(12.5pmol) 0.33μ …

将siRNA转染入贴壁动物细胞（如哺乳动物细胞系、昆虫细胞系）。 以24孔板siRNA转染为例： (1) 转染前一天，接种适当数量的细胞至细胞培养板中，使转染时的细胞密度能够达到30~50％(不同细胞生长速度不一样，因此，接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验)，请使用无抗生素的培养基。 注意：转染时，细胞密度是影响转染效率的关键因素之一，细胞生长过度会削弱细 …

EntransterTM-in vivo体内转染试剂 产品介绍 EntransterTM-in vivo是英格恩生物公司（Engreen Biosystem Co,Ltd.）最新研发合成的用于动物体内转染的转染试剂。EntransterTM-in vivo动物体内转染试剂可将小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor或DNA转染到动 …

方法 表达 细胞毒性 细胞类型 注释 优势 劣势 瞬时 稳定 脂质体介导方案1 可 可 可变 贴壁细胞，原代细胞系，悬浮培养体系 阳离子脂质与带负电荷的DNA 结合， 有的形成人工膜囊泡（脂质体）。产生的稳定阳离子复合物吸附并融合于带负电荷的细胞膜( Feigner et al. 1987, 1994 ) 免疫原性和细胞毒性低；可使用大质粒， 安全风险低，操 …

图1 乳酸脱氢酶催化的可逆反应 常用的细胞毒性测定方法的基础是测量受损细胞释放的胞浆酶的活性。乳酸脱氢酶( LDH ) 是一种所有细胞中均存在的稳定的胞浆酶。在不同类型的组织中存在5 种不同的乳酸脱氢酶异构体，它们在数量、特异性和酶作用动力学方面存在差异。但所有不同的酶异构体均催化相同的丙酮酸和乳酸相互转化，伴随着NADH 氧化为NAD+的反应（图1) 。当 …

一、试剂 完全培养基、DMEM 培养基、胎牛血清（FBS)、慢病毒载体储备液、多聚甲酸( 4%) （ 可选；见步骤15)、青霉素／慢病毒滴定试剂盒链霉素溶液( P/S ) （100 ×)、磷酸盐缓冲盐水( PBS )、聚凝胺（海美溴铵） ( 8mg/mL) 、QuickTiter （慢病毒相关的HIV p24 )、293T 细胞、胰蛋白酶－EDTA ( 0. …