2023年 2月 3日, 星期五
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Tag Archives: 转染

做慢病毒感染实验前,你需要哪些知识储备?

慢病毒载体的构建: 慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成,即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白;载体成分则与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转 …

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通过乳酸脱氢酶法分析细胞活力

图1 乳酸脱氢酶催化的可逆反应 常用的细胞毒性测定方法的基础是测量受损细胞释放的胞浆酶的活性。乳酸脱氢酶( LDH ) 是一种所有细胞中均存在的稳定的胞浆酶。在不同类型的组织中存在5 种不同的乳酸脱氢酶异构体,它们在数量、特异性和酶作用动力学方面存在差异。但所有不同的酶异构体均催化相同的丙酮酸和乳酸相互转化,伴随着NADH 氧化为NAD+的反应(图1) 。当 …

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通过转染双链siRNA 在果蝇S2 细胞中进行RNA 干扰

本方案介绍一种通过试剂向果蝇S2 细胞转运siRNA 以触发RNA 干扰的有效方法。本方案适用于24 孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿,需要根据培养孔的表面积换算细胞密度和试剂用量(表1 ) 。 表1 果蝇细胞转染所用细胞, 转染试剂和siRNA (或者ASO) 的体积 培养板或培养皿 24孔 12孔 6孔 6cm 10cm 每孔 …

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通过转染双链siRNA 在哺乳动物细胞中进行RNA 干扰

长链dsRNA 不能用于多数哺乳动物细胞中,这是由于它能诱导干扰素反应而引发基因表达和细胞凋亡的变化。本方案介绍了一种向哺乳动物细胞中转入短的双链siRNA 的方法,双链siRNA 因其长度过短而不能引起与dsRNA 相关的序列非特异性反应。本方案适用于24 孔板中生长的细胞。如果使用了其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿,则需要根据培养孔的表面积换算细胞密度 …

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动物体内转染需要哪些条件?

1.每次动物实验,需要准备什么东西,器材? ①转染的核酸,如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。 2.可以转染的核酸都有什么?细胞实验的核酸可以用吗? 可以转染小片断RNA如siRNA,miRNA,mimic、inhibitor,也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要 …

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如何使动物体内病毒感染效率提高20-50倍

由于动物体内环境的复杂性,我们在选择动物体内病毒感染试剂时,会区别于细胞实验。通常为避免动物产生过激的免疫反应或者死亡,这类病毒感染试剂纯度会更高些,并且适配体液环境。因此,争对动物体内病毒感染实验,则需要适配特定的动物体内病毒感染增强试剂。 发表在《aging》上的一篇题为“Ubenimex induces autophagy inhibition and …

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将siRNA转染入贴壁动物细胞的转染方案及相关检测

将siRNA转染入贴壁动物细胞(如哺乳动物细胞系、昆虫细胞系)。 以24孔板siRNA转染为例: (1) 转染前一天,接种适当数量的细胞至细胞培养板中,使转染时的细胞密度能够达到30~50%(不同细胞生长速度不一样,因此,接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验),请使用无抗生素的培养基。 注意:转染时,细胞密度是影响转染效率的关键因素之一,细胞生长过度会削弱细 …

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通过alamarBlue 法分析细胞活力

水溶性染料 alamarBlue 已用于体外定量多种类型细胞的活力( Fields and Lancaster 1993; Ahmed et al. 1994 ) 。该试剂极其稳定且无毒,因此可用于长时间连续监测细胞( Ahmed et al. 1994 ) 。基于上述原因, alamarBlue法被认为优于MTT 检测等经典的细胞活力检测方法。在一个比较实 …

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转染实验如何设置对照?

所有的转染实验均应包括对照,以检验各个试剂和制备的质粒DNA , 以及检测将要引入的基因或构建体的毒性。 瞬时表达的对照 阴性对照 在瞬时转染实验中,需要用载体DNA 和/或用于稀释待测质粒或基因的缓冲液转染一两个培养皿的细胞。通常采用鲑鱼精DNA 或用于构建重组体的空载体等其他惰性载体代替待测基因转染贴壁细胞。转染后,培养的细胞不应从培养皿上脱落,外观上也 …

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成功转染siRNA的主要关键点有什么?

1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要,最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果,减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是,需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …

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