2023年 6月 9日, 星期五
新闻

Tag Archives: 转染

通过MTT 法分析细胞活力

在众多依赖于活细胞将底物转化为生色产物的活力检测方法中,由Mossman ( 1983 )建立的MTT 法仍是最通用、最流行的方法之一。在MTT 法中,水溶性的黄色染料MTT [3-(4 , 5 - 二甲基噻唑-2)-2 , 5 -二苯基四唑溴盐] 在线粒体还原酶作用下转化为不溶性的紫色甲臜( 图1 ) 。随后甲臜被溶解,其浓度通过570nm 下的OD 值被 …

阅读更多 »

在果蝇S2细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA 功能

本方案描述了将ASO 转入果蝇S2 细胞以便抑制miRNA 功能的方法。通过检测miRNA靶蛋白水平或miRNA 靶基因3UTR 报道基因的活性,可以检测ASO 对miRNA 的效应。本方案是针对24 孔板设计的,若用其他多孔板、培养瓶或不同直径培养皿,应根据其表面积计算细胞密度和试剂体积 。 试剂 ASO ( 12.5μmol/L ) 和错配和/或无关对照 …

阅读更多 »

如何选择合适的转染方式?

方法 表达 细胞毒性 细胞类型 注释 优势 劣势 瞬时 稳定 脂质体介导方案1 可 可 可变 贴壁细胞,原代细胞系,悬浮培养体系 阳离子脂质与带负电荷的DNA 结合, 有的形成人工膜囊泡(脂质体)。产生的稳定阳离子复合物吸附并融合于带负电荷的细胞膜( Feigner et al. 1987, 1994 ) 免疫原性和细胞毒性低;可使用大质粒, 安全风险低,操 …

阅读更多 »

高效低毒的RNA转染试剂,收藏~

EntransterTM-R4000是英格恩生物(Engreen Biosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。  EntransterTM系列转染试剂的成分和原理 Entr …

阅读更多 »

在哺乳动物细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA 功能

向哺乳动物细胞内转染反义寡核苷酸从而抑制miRNA 功能的具体方法参照本方案。通过检测miRNA 靶蛋白水平或携带miRNA 靶基因的3’端非翻译区( 3UTR ) 报道基因的活性来检测ASO 对于miRNA 的效应。本方案主要针对24 孔板设计,如果用其他多孔板、细胞瓶或不同直径培养皿培养细胞,需根据孔/瓶表面积计算细胞密度和试剂体积 试剂 A …

阅读更多 »

将siRNA转染入贴壁动物细胞的转染方案及相关检测

将siRNA转染入贴壁动物细胞(如哺乳动物细胞系、昆虫细胞系)。 以24孔板siRNA转染为例: (1) 转染前一天,接种适当数量的细胞至细胞培养板中,使转染时的细胞密度能够达到30~50%(不同细胞生长速度不一样,因此,接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验),请使用无抗生素的培养基。 注意:转染时,细胞密度是影响转染效率的关键因素之一,细胞生长过度会削弱细 …

阅读更多 »

电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备

一、材料和试剂 恒温旋转式摇床 三角烧瓶(容量为1或2L) 50ml灭菌离心管 低温高速离心机 SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨     20g 细菌培养用酵母提取物      5g NaCl                     0.5g 去离子水                 950ml 250mmol/L KCl溶液        10ml 以5N …

阅读更多 »

电转效率受哪些因素影响?

电穿孔效率受以下几种因素的影响: 外加电场的强度。电压过低,培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过; 电压过高,细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系, 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔, 20% ~ 50%的细胞能够存活(根据台盼蓝拒染法的检测结果) ( Patterson 1979; Baum et al. …

阅读更多 »

转染用的质粒,你提对了吗?

老板天天催着要实验进展,是不是很郁闷?可是细胞不给力,是不是很忧郁?刚刚复苏的细胞长的挺好的,可是转染后,细胞状态莫名其妙就变差了,是不是很伤心?转染试剂毒性大,换转染试剂?结果还是一样,是不是很无奈?勉强收了一点点细胞,可是还不够做个western blot的,是不是很抓狂?实验总是不能顺利进行,找不到原因,是不是都要吐血了?没人给指点迷津,是不是心都要碎 …

阅读更多 »