首先siRNA由于只 …
阅读更多 »western-blot化学发光(ECL)时,胶片上条带很浓怎么办?
可通过以下几个方面进行改进: 1. 可减少蛋白上样量; 2. 降低一抗二抗稀释度,减少抗体孵育时间; 3. 如果背景深的话,则要把发光液沥干些再压片;如果背景不深则需减少发光时间和显影时间。 4.选择合适的发光液,比如Enlight。
阅读更多 »Q1: 一个孔中应接 …
阅读更多 »可通过以下几个方面进行改进: 1. 可减少蛋白上样量; 2. 降低一抗二抗稀释度,减少抗体孵育时间; 3. 如果背景深的话,则要把发光液沥干些再压片;如果背景不深则需减少发光时间和显影时间。 4.选择合适的发光液,比如Enlight。
阅读更多 »血管性痴呆(VD)是老年痴呆的第二大病因,仅次于阿尔茨海默病(AD),在西方国家占所有痴呆病例的17.6%,研究表明在世界东部地区,包括中国和日本人口中,认知功能障碍的人数要更多。认知功能障碍广泛被认为是痴呆患者的经典特征。VD,以各种脑血管疾病为特征的损伤综合征主要与缺血性脑血管疾病相关。目前,VD的确切发病机制仍不清楚。因此,有必要更详细地阐明该病症背后 …
阅读更多 »转染效率低的原因可从以下几方面找: 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策:用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策:对大多数细胞而言,质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3,一般要做优化实验,比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策:用好的质粒纯化试剂确保质粒DN …
阅读更多 »为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
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